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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 长PCR产物没有结果

做了,一个长片段PCR,大概跑了8个多小时。结果不仅没有带,而且有很大拖尾,用的模板和以前的相同,引物有变,以前跑出来过。
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-08-14 11:24:04
目的产物是多长?有10KB吗?

可能是8kb到10kb吧!
5楼2012-08-14 14:15:03
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by healy13 at 2012-08-14 13:07:13
几个因素:模板浓度有问题;引物浓度有问题;PCR体系加错;保真酶失活;退火温度和延伸时间不准确等等。。。。。这些一个个取摸索,建议先从退火问问试试看!

1,引物浓度和延伸时间可以排除吧,延伸时间是15分钟啊!
2,和实验室的同门用的酶相同,应该也没问题。
3,体系是25微升的。
4,问题主要集中在模版浓度和退火温度上了,前面的图是设了梯度的,结果每个梯度的都没有结果。
6楼2012-08-14 14:24:33
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

内容已删除
10楼2012-08-20 10:01:41
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