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长PCR产物没有结果
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西区五号楼
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长PCR产物没有结果
做了,一个长片段PCR,大概跑了8个多小时。结果不仅没有带,而且有很大拖尾,用的模板和以前的相同,引物有变,以前跑出来过。
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1楼
2012-08-14 10:33:03
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拖尾弥散的是非特异扩增,样孔亮的是模板有杂志,100bp下有带的是引物二聚体。
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2楼
2012-08-14 11:14:09
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wu_shiyong
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目的产物是多长?有10KB吗?
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低调稳重务实内敛---------------残
3楼
2012-08-14 11:24:04
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healy13
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2012-08-15 13:39:29
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4楼
2012-08-14 13:07:13
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3楼
:
Originally posted by
wu_shiyong
at 2012-08-14 11:24:04
目的产物是多长?有10KB吗?
可能是8kb到10kb吧!
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5楼
2012-08-14 14:15:03
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healy13
at 2012-08-14 13:07:13
几个因素:模板浓度有问题;引物浓度有问题;PCR体系加错;保真酶失活;退火温度和延伸时间不准确等等。。。。。这些一个个取摸索,建议先从退火问问试试看!
1,引物浓度和延伸时间可以排除吧,延伸时间是15分钟啊!
2,和实验室的同门用的酶相同,应该也没问题。
3,体系是25微升的。
4,问题主要集中在模版浓度和退火温度上了,前面的图是设了梯度的,结果每个梯度的都没有结果。
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6楼
2012-08-14 14:24:33
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healy13
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西区五号楼: 金币+2
2012-08-17 09:29:09
本帖内容被屏蔽
7楼
2012-08-14 14:36:17
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tanglian8655
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应该先试一试退火温度,慢慢摸索,多设几个梯度试试看
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8楼
2012-08-16 15:54:09
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tanglian8655
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很有帮助
2012-08-17 09:29:19
还有就是,你反应时间过长,东西都被降解了!
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9楼
2012-08-16 15:55:12
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10楼
2012-08-20 10:01:41
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