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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长PCR产物没有结果
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 长PCR产物没有结果

做了，一个长片段PCR，大概跑了8个多小时。结果不仅没有带，而且有很大拖尾，用的模板和以前的相同，引物有变，以前跑出来过。
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1楼 2012-08-14 10:33:03
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coal@live.cn

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
拖尾弥散的是非特异扩增，样孔亮的是模板有杂志，100bp下有带的是引物二聚体。
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2楼2012-08-14 11:14:09
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
目的产物是多长？有10KB吗？
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低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-08-14 11:24:04
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-15 13:39:29
本帖内容被屏蔽
4楼2012-08-14 13:07:13
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-08-14 11:24:04
目的产物是多长？有10KB吗？

可能是8kb到10kb吧！
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5楼2012-08-14 14:15:03
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by healy13 at 2012-08-14 13:07:13
几个因素：模板浓度有问题；引物浓度有问题；PCR体系加错；保真酶失活；退火温度和延伸时间不准确等等。。。。。这些一个个取摸索，建议先从退火问问试试看！

1，引物浓度和延伸时间可以排除吧，延伸时间是15分钟啊！
2，和实验室的同门用的酶相同，应该也没问题。
3，体系是25微升的。
4，问题主要集中在模版浓度和退火温度上了，前面的图是设了梯度的，结果每个梯度的都没有结果。
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6楼2012-08-14 14:24:33
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★
西区五号楼: 金币+2 2012-08-17 09:29:09
本帖内容被屏蔽
7楼2012-08-14 14:36:17
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tanglian8655

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该先试一试退火温度，慢慢摸索，多设几个梯度试试看
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8楼2012-08-16 15:54:09
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tanglian8655

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西区五号楼: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-17 09:29:19
还有就是，你反应时间过长，东西都被降解了！
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9楼2012-08-16 15:55:12
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西区五号楼

新虫 (小有名气)
内容已删除
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10楼2012-08-20 10:01:41
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