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lpsyz007

新虫 (小有名气)

[求助] PCR反应体系求助

本科菜鸟PCR个人用的的是20（单位微升）的体系大概是BUFFER 2.0 dNTPs 0.4 Tap 0.4 正反引物 2 模板DNA 1.2 水 14.这是我用的 最后老师说这个体系做不出，我看了一下老师的体系BUFFER 2.0 dNTPs 0.3 Tap 0.5 正反引物 2 模板DNA 2 水 13.2.求高手给个解释啊！！！！！我的体系是什么问题？？？
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1楼 2012-07-16 10:23:21
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by eargle at 2012-07-16 12:33:41
你的PCR体系DNA还是要加到2ul，你在配你的PCR反应体系时，不要光看别人的体系，还要看他加那些材料的浓度是多少，不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积，BUFFER（加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板 ...

buffer必须按照规定稀释，我们使用的是25ul体系，模板50-150ng，正反引物各1，buffer2.5，dNTP0.5，taq 0.2（1个单位），剩下的用水补充到25ul
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9楼2013-05-02 10:42:39
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eargle

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-16 13:54:11
你的PCR体系DNA还是要加到2ul，你在配你的PCR反应体系时，不要光看别人的体系，还要看他加那些材料的浓度是多少，不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积，BUFFER（加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板DNA 2 水 12.6.  可以试一下
一般PCR反应用25ui的比较多些，也有用50ul的。
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结识每个虫友，将是我的又一大荣幸！
2楼2012-07-16 12:33:41
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lpsyz007

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eargle at 2012-07-16 12:33:41
你的PCR体系DNA还是要加到2ul，你在配你的PCR反应体系时，不要光看别人的体系，还要看他加那些材料的浓度是多少，不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积，BUFFER（加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板 ...

dNTPs和Tap的量比如有什么比例之类的 还有就是正反引物和模板DNA要一样？？这是为什么呢？
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3楼2012-07-16 20:35:47
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:48:00
购买的酶的公司网站应该有酶的说明书，不过个人觉得，模板还是加少点，之前试过模板加多，后来减少模板，杂带会明显减少，现在一直都是加20纳克/微升，这只是我的做法，希望对你有帮助。
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4楼2012-07-17 07:27:51
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