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lpsyz007

新虫 (小有名气)

[求助] PCR反应体系求助

本科菜鸟PCR个人用的的是20(单位微升)的体系大概是BUFFER 2.0 dNTPs 0.4 Tap 0.4 正反引物 2 模板DNA 1.2 水 14.这是我用的 最后老师说这个体系做不出,我看了一下老师的体系BUFFER 2.0 dNTPs 0.3 Tap 0.5 正反引物 2 模板DNA 2 水 13.2.求高手给个解释啊!!!!!我的体系是什么问题???
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lpsyz007

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by eargle at 2012-07-16 12:33:41
你的PCR体系DNA还是要加到2ul,你在配你的PCR反应体系时,不要光看别人的体系,还要看他加那些材料的浓度是多少,不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积,BUFFER(加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板 ...

dNTPs和Tap的量比如有什么比例之类的 还有就是正反引物和模板DNA要一样??这是为什么呢?
3楼2012-07-16 20:35:47
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lpsyz007

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-17 09:12:15
引物并不是要和模版一样,这个只能说是你的体系刚好一样。另外2着也没有太多的关系,主要的是酶和dNTP够用就好,当然浓度也不能太大。PCR体系是要靠自己摸索的,而不是单纯的去做自己或别人(即使是老师)给的体系 ...

谢谢
7楼2012-07-18 10:30:05
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