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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为嘛我的蛋白跑出来总是这个样子？
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

[交流] 为嘛我的蛋白跑出来总是这个样子？

如题。
左起第5孔为蛋白marker，明显混有样品，重复数次，都有这种情况出现，请问是什么原因呢？
分离胶配好后，放置1h，浓缩胶配好后，放置1h，样片量均为10ul，marker量为5ul，说明书上建议使用量。后来隔一个孔点样，胶扫描之后，显示上样的空也有条带出现。点样时很小心尽量避免了混样，结果依旧不理想。到底该怎么办呢？
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1楼 2012-07-05 15:06:12
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gelois

金虫 (正式写手)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
是不是MARKER本身就已经被污染了，用一只新的MARKER和旧的跑胶对比一下。
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2楼2012-07-05 15:58:17
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-07-05 15:58:17
是不是MARKER本身就已经被污染了，用一只新的MARKER和旧的跑胶对比一下。

嗯谢谢，我会试试看。不过marker是新买的，第一次用就这种情况。加样时用灭菌过的枪头，估计污染的可能性不是很大。
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3楼2012-07-05 16:13:52
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luweiwei1015

金虫 (知名作家)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
是不是在制胶的过程中你混入了其他的杂质？！
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4楼2012-07-05 16:43:39
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luweiwei1015

金虫 (知名作家)
楼主补充一点，在制胶过程中一定耐心细心的做的，要是用的是凝胶电泳仪的话，你最好用重力让气泡跑出来，这样出来的胶就会比现在的好看些！
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5楼2012-07-05 16:45:59
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krupt

银虫 (小有名气)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
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6楼2012-07-05 16:48:09
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rice1007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-05 20:21:36
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胡乱走走2011
8楼2012-07-05 16:57:48
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hnzhaolongfei

木虫 (著名写手)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
点样环节出问题了，点上后马上就跑，时间稍长就会弥散。
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10楼2012-07-05 17:10:18
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
好像是点样的问题哦~~~~~~~~~~~~~~~~~
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12楼2012-07-05 17:33:33
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
路过的，瞅瞅！
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13楼2012-07-05 18:11:49
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啄虫鸟

新虫 (著名写手)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
闲来逛逛……
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15楼2012-07-05 18:27:56
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liang8887

至尊木虫 (文坛精英)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
见识了！
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16楼2012-07-05 18:29:37
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捡金小儿

新虫 (著名写手)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
得金币了，说声谢谢！
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18楼2012-07-05 18:34:22
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luweiwei1015 at 2012-07-05 16:43:39
是不是在制胶的过程中你混入了其他的杂质？！

这个不是很确定，我下次把烧杯洗干净些吧。制胶那些试剂用过之后都是放4度冰箱的。
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20楼2012-07-05 21:08:50
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by rice1007 at 2012-07-05 16:57:48
你的marker没有问题，是你点样时出了问题。
做蛋白电泳上样时，应该注意以下几点：
1.每孔点样的量要一致。（你的样品和marker上样量应该要一致，marker建议上样量是5，但是你应该再混入5的上样缓冲液；如果上样量 ...

你的两点建议很有用，非常感谢。
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21楼2012-07-05 21:10:48
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hnzhaolongfei at 2012-07-05 17:10:18
点样环节出问题了，点上后马上就跑，时间稍长就会弥散。

是上样后马上跑的
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22楼2012-07-05 21:11:10
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healy13

禁虫 (小有名气)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
23楼2012-07-06 12:15:12
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by healy13 at 2012-07-06 12:15:12
你的胶有问题！~配胶成分有没有加错~

谢谢~~应该不会加错吧？把配胶成分写在一张纸上，每次都按顺序来加
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24楼2012-07-06 15:12:02
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牛家神通

新虫 (初入文坛)
★
胡乱走走2011(金币+1): 谢谢参与
我的以前也出现过这种情况，你看一下你的母液是不是变粘了，如果是这样就是应该换母液了。
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25楼2013-05-06 10:34:15
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简单回复
发芽豆LL7楼
2012-07-05 16:51   回复  
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hr6309楼
2012-07-05 17:04   回复  
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cilinxue11楼
2012-07-05 17:32   回复  
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严雪旗14楼
2012-07-05 18:26   回复  
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sunjian于17楼
2012-07-05 18:33   回复  
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jiang8wei519楼
2012-07-05 19:02   回复  
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