应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。
141/1返回列表
查看: 4233  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lengol

新虫 (初入文坛)

[交流] western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。

最近一直被这鬼东西所苦恼，就是孵了一抗二抗之后，第一次b-actin曝光条带还算可以，但是第二次曝光就没结果了，因为我的目的蛋白没有显影出来，所以想多曝光一会儿可以让他出来。但是第二次却啥都没有了，或者就是很浅。我尝试过将上样量变大，浓度是0.8，用的30ul，35ul，40ul，50ul，后来连b-catin都没了。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-06-04 12:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yuyelin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
lengol(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 同问 2012-06-04 15:27:44
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖！ 2012-06-05 08:16:37
你曝光时间多长？时间太长的话，荧光会变弱，消失的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-06-04 15:13:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

啊Q精神

木虫 (小有名气)
★
lengol(金币+1): 谢谢参与
显色液不行了，荧光衰减了，国产的也就最多半小时。
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-04 19:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cfynocry

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得吧曝光时间是不能太长的哈，
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-05 08:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

废哥117

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是用ECL显色吗？为什么要先做actin而不做目的蛋白呢？还有就是第一次和第二次是什么意思?你的膜重新孵抗体了？
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-05 09:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lengol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuyelin at 2012-06-04 15:13:42
你曝光时间多长？时间太长的话，荧光会变弱，消失的。

第一次曝光5min，有时候目的蛋白比较浅，就曝光第二次，时间延长到十分钟甚至半小时，显影发现美东西。。。
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-05 10:32:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lengol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 啊Q精神 at 2012-06-04 19:55:58
显色液不行了，荧光衰减了，国产的也就最多半小时。

就发光剂？用的thermo的，以前做的时候感觉还可以。
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-05 10:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lengol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 废哥117 at 2012-06-05 09:33:19
你是用ECL显色吗？为什么要先做actin而不做目的蛋白呢？还有就是第一次和第二次是什么意思?你的膜重新孵抗体了？

嗯，ECL，两个蛋白石一起做的，actin和目的蛋白分开孵育一抗二抗，第一次指的是第一次曝光，第二次指的是第二次曝光。第一次曝光5min应该不算长，但是有时候觉得目的蛋白的条带太浅或者没有条带，就尝试延长一下时间，然后就没任何东西，或者就只有一点背景了。。
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-05 10:37:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

废哥117

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的蛋白你加了AB液后黑暗中观察有没有荧光出现？如果没有的话，很多情况下压再长时间你都不会出来。
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-05 15:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lengol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 废哥117 at 2012-06-05 15:41:55
目的蛋白你加了AB液后黑暗中观察有没有荧光出现？如果没有的话，很多情况下压再长时间你都不会出来。

这个还真没有，但是有时候目的蛋白压的时间长了之后就能出现条带，而且较为清晰。但是有时候又没有，条件没有改变，总觉得很不稳定
赞一下 回复此楼
10楼2012-06-05 17:36:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

frank009

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
11楼2014-04-03 22:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

传承

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到了这个问题，我觉得是TBST的问题。现在正在摸索中。
赞一下 回复此楼
12楼2015-03-26 12:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

弗德_WB优化

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 啊Q精神 at 2012-06-04 19:55:58
显色液不行了，荧光衰减了，国产的也就最多半小时。

试试FD的
回复此楼
13楼2015-05-12 11:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋进的女孩

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的问题解决了么？我也在迷糊当中，求指点
赞一下 回复此楼
14楼2015-07-21 19:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lengol 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭