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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。
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lengol

新虫 (初入文坛)

[交流] western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。

最近一直被这鬼东西所苦恼，就是孵了一抗二抗之后，第一次b-actin曝光条带还算可以，但是第二次曝光就没结果了，因为我的目的蛋白没有显影出来，所以想多曝光一会儿可以让他出来。但是第二次却啥都没有了，或者就是很浅。我尝试过将上样量变大，浓度是0.8，用的30ul，35ul，40ul，50ul，后来连b-catin都没了。。
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1楼 2012-06-04 12:40:58
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lengol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 废哥117 at 2012-06-05 09:33:19
你是用ECL显色吗？为什么要先做actin而不做目的蛋白呢？还有就是第一次和第二次是什么意思?你的膜重新孵抗体了？

嗯，ECL，两个蛋白石一起做的，actin和目的蛋白分开孵育一抗二抗，第一次指的是第一次曝光，第二次指的是第二次曝光。第一次曝光5min应该不算长，但是有时候觉得目的蛋白的条带太浅或者没有条带，就尝试延长一下时间，然后就没任何东西，或者就只有一点背景了。。
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8楼2012-06-05 10:37:23
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yuyelin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
lengol(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 同问 2012-06-04 15:27:44
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖！ 2012-06-05 08:16:37
你曝光时间多长？时间太长的话，荧光会变弱，消失的。
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2楼2012-06-04 15:13:42
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啊Q精神

木虫 (小有名气)
★
lengol(金币+1): 谢谢参与
显色液不行了，荧光衰减了，国产的也就最多半小时。
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3楼2012-06-04 19:55:58
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cfynocry

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得吧曝光时间是不能太长的哈，
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4楼2012-06-05 08:44:07
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