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lengol

新虫 (初入文坛)


[交流] western blot 第一次曝光有条带,而且浓厚,第二次就没有了。。。

最近一直被这鬼东西所苦恼,就是孵了一抗二抗之后,第一次b-actin曝光条带还算可以,但是第二次曝光就没结果了,因为我的目的蛋白没有显影出来,所以想多曝光一会儿可以让他出来。但是第二次却啥都没有了,或者就是很浅。我尝试过将上样量变大,浓度是0.8,用的30ul,35ul,40ul,50ul,后来连b-catin都没了。。
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啊Q精神

木虫 (小有名气)



lengol(金币+1): 谢谢参与
显色液不行了,荧光衰减了,国产的也就最多半小时。
3楼2012-06-04 19:55:58
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yuyelin

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
lengol(金币+1): 谢谢参与
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 同问 2012-06-04 15:27:44
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-06-05 08:16:37
你曝光时间多长?时间太长的话,荧光会变弱,消失的。
2楼2012-06-04 15:13:42
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cfynocry

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得吧曝光时间是不能太长的哈,
4楼2012-06-05 08:44:07
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废哥117

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是用ECL显色吗?为什么要先做actin而不做目的蛋白呢?还有就是第一次和第二次是什么意思?你的膜重新孵抗体了?
5楼2012-06-05 09:33:19
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