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蛋白之家

新虫 (小有名气)

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[交流] 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上，就是回收的时候浓度小，但连了好多次都连不上啊试过4:1 ，3:1的比例，不是说连接的时候3:1的比例是最好的么为什么连不上啊很纠结
希望各位大侠前来帮忙，谢谢!

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1楼2012-05-29 15:05:57

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 萝卜丝儿 at 2012-05-29 22:40:07
你说你回收后的浓度低，到底是多少低？还有回收后的片段质量如何？比如A260/280,这个值最好介于1.6-2.0之间，高于2.0是rna污染，低于1.6是蛋白质污染，你片段连接是否是粘性末端或者是平末端，前者效率会比后者高一 ...

谢谢您的种种提醒
首先回收后的浓度最低的是5ng/μl，最大的也就是质粒浓度时11ng/μl A260/A280均为1.714-1.84之间，连接时粘性末端
我测了浓度之后按3:1的比例又试过了做了16个板子，有两个板子上长了菌落