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蛋白之家

新虫 (小有名气)


[交流] 关于酶切后的连接问题,共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上,就是回收的时候浓度小,但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ,3:1的比例,不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙,谢谢!
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蛋白之家

新虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蓝心1728 at 2012-05-30 13:50:43
1、如果酶切以后浓度低的话,可以多切几管,并在一起,回收后打开盖子,晾一晚,相当于稍微浓缩下
2、连接前,至少点5微升溶液可以看到条带,虽然连接成败主要看比例,但若浓度太低效果不好
3、连接比例可以按DNA ...

这次我又重新做了  载体浓度为43.5和17.5 ng/ul   目的片段浓度为分别为12  44.5  16 ng/ul
我按着摩尔数比  载体:目的=1:3  1:2  1:9 的比例又连接了   体系是10ul   可是就是连不上啊   做的对照是用现成的质粒  现成质粒的板子上有菌落   其他的都没有   很郁闷  麻烦您给分析一下
15楼2012-06-01 09:39:42
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张宏宇123

金虫 (著名写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊?
2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能,先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧,效果可能会好些
4楼2012-05-29 20:21:33
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