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蛋白之家

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[交流] 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上，就是回收的时候浓度小，但连了好多次都连不上啊试过4:1 ，3:1的比例，不是说连接的时候3:1的比例是最好的么为什么连不上啊很纠结
希望各位大侠前来帮忙，谢谢!

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1楼2012-05-29 15:05:57

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引用回帖:

12楼: Originally posted by 蓝心1728 at 2012-05-30 13:50:43
1、如果酶切以后浓度低的话，可以多切几管，并在一起，回收后打开盖子，晾一晚，相当于稍微浓缩下
2、连接前，至少点5微升溶液可以看到条带，虽然连接成败主要看比例，但若浓度太低效果不好
3、连接比例可以按DNA ...

这次我又重新做了载体浓度为43.5和17.5 ng/ul 目的片段浓度为分别为12 44.5 16 ng/ul
我按着摩尔数比载体:目的=1:3 1:2 1:9 的比例又连接了体系是10ul 可是就是连不上啊做的对照是用现成的质粒现成质粒的板子上有菌落其他的都没有很郁闷麻烦您给分析一下