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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步
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蛋白之家

新虫 (小有名气)

[交流] 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上，就是回收的时候浓度小，但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ，3:1的比例，不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙，谢谢!
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1楼 2012-05-29 15:05:57
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蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蓝心1728 at 2012-05-30 13:50:43
1、如果酶切以后浓度低的话，可以多切几管，并在一起，回收后打开盖子，晾一晚，相当于稍微浓缩下
2、连接前，至少点5微升溶液可以看到条带，虽然连接成败主要看比例，但若浓度太低效果不好
3、连接比例可以按DNA ...

谢谢  很感谢
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14楼2012-05-30 15:00:39
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查看全部 19 个回答

张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊？
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2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能，先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧，效果可能会好些
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-29 20:21:33
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