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shengnan1987

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题

我做的是一种蛋白酶的原核表达，c端带一个his标签，大小31kd，等电点10，pet24a可溶表达，但表达量不高，不到50%，用镍柱纯化，Binding: 20 mM sodium phosphate, 20 mM Imidazole,500 mM NaCl, PH 8.0
Elution: 20 mM sodium phosphate, 500 mM Imidazole,
500 mM NaCl, PH8.0
调整咪唑的浓度，要么峰型好，但杂带还是很多；要么没有特异的峰出现。请问各位高手有没有好的纯化方法？非常感谢

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走自己的路

1楼 2012-05-27 13:06:47

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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西瓜: 金币+3, Good！ 2012-05-29 18:53:56

表达量不高，和纯化有一定的关系，但主要还是看你的菌株表达问题，你的蛋白在包涵体内多吗？如果不多，那就排除这个问题。
你可以在洗脱之前多加几个梯度去洗杂带，我以前是手动纯化的，所以对你说的峰之类的可能不是很了解，但我做HPLC，应该也明白，如果浓度不高，在同一个菌株的情况下，你可以选择浓缩，用浓缩管就可以，很方便

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8楼2012-05-28 14:49:17

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孙启亮

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