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donnafeng金虫 (小有名气)
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蛋白浓缩沉淀？二硫键？
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我的蛋白质单体含3个半胱氨酸 可能2-4聚体 ni柱纯化后过脱盐柱 浓缩蛋白时 出现沉淀 用透析袋加聚乙二醇浓缩时 浓缩到一定程度后 蛋白浓缩液在透析带里是澄清的 挤压几次透析带立刻出现白色沉淀 而用超滤浓缩管浓缩到一定程度后 溶液澄清澄清，枪头吹打几次以后立刻出现沉淀 1 到底是为什么呢 是因为吹打或者是挤压的过程导致二硫键的生成吗？ 如果是这种情况浓缩过程加DTT可以吗 2 这个蛋白活性形式是二聚体形式 其他来源的这个蛋白有晶体结构 怎么看pdb文件看这个二聚体是不是有二硫键连接 用pymol软件能看出来吗？ 3 如果活性形式是通过二硫键形成的二聚体 是不是就不能加DTT呢？ 怎么才能让它以二聚体的形式存在而不是其他形式存在呢？ 4 我的这个蛋白是胞内酶 大肠杆菌胞内是还原性条件 是不是所有胞内酶都没有二硫键 而是以半胱氨酸的活性形式存在？那是不是在破碎细胞这一步的时候就因该加DTT [ Last edited by donnafeng on 2012-5-2 at 11:02 ] |
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sayaya
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8楼2012-05-03 10:34:11