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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR呈阳性，但质粒做PCR却做不出来
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chlamy

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR呈阳性，但质粒做PCR却做不出来

各位虫友：

最近用做酶切连接，挑克隆。用煮沸的菌液上清做PCR的模板，质粒上特有序列做引物，能够扩增出来。并且以这次的扩增产物为模板，再用其中内部的一对引物进行PCR，也能扩增出目的条带出来，但我用提取的质粒做PCR的模板时就是P不出来，这是怎么回事呢？请高手指点……
先谢过。
注：已经试过DH5a和JM109两种菌株，
自己猜测过是不是整合到基因组上去了，加热煮沸菌体的上清中混有细菌的基因组DNA，故菌液可以扩增出，但质粒不可以啊。
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1楼 2012-04-28 23:58:56
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chlamy: 金币+1, ★有帮助 2012-04-29 00:32:36
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-29 15:33:22
chlamy: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-06-21 11:40:37
嗯.....................
       我觉得啊，没那么复杂，你可先试试双酶切，看能不能把切下你的PCR条带，或你PCR产物上有质粒上没有的酶切位点是否酶切后正常线性化，要是实在头疼，建议送测，正反一个反应确定是你的东西就可以了
       PCR太诡异，一切都不好说............
       个人看法 若有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
2楼2012-04-29 00:10:11
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chlamy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-29 00:10:11:
嗯.....................
       我觉得啊，没那么复杂，你可先试试双酶切，看能不能把切下你的PCR条带，或你PCR产物上有质粒上没有的酶切位点是否酶切后正常线性化，要是实在头疼，建议送测，正反一个反应确定是 ...

3楼2012-04-29 00:32:24
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