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chlamy木虫 (小有名气)
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[求助]
菌液PCR呈阳性，但质粒做PCR却做不出来
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各位虫友： 最近用做酶切连接，挑克隆。用煮沸的菌液上清做PCR的模板，质粒上特有序列做引物，能够扩增出来。并且以这次的扩增产物为模板，再用其中内部的一对引物进行PCR，也能扩增出目的条带出来，但我用提取的质粒做PCR的模板时就是P不出来，这是怎么回事呢？请高手指点…… 先谢过。 注：已经试过DH5a和JM109两种菌株， 自己猜测过是不是整合到基因组上去了，加热煮沸菌体的上清中混有细菌的基因组DNA，故菌液可以扩增出，但质粒不可以啊。 |
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atlanticwi
金虫 (正式写手)
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嗯..................... 我觉得啊，没那么复杂，你可先试试双酶切，看能不能把切下你的PCR条带，或你PCR产物上有质粒上没有的酶切位点是否酶切后正常线性化，要是实在头疼，建议送测，正反一个反应确定是你的东西就可以了 PCR太诡异，一切都不好说............ 个人看法 若有说错请高手指点  |
2楼2012-04-29 00:10:11
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3楼2012-04-29 00:32:24
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