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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

[求助] 恐怖的PCR电泳条带。。。。。。。。。。

恐怖的电泳条带,请各位老师看看是如何造成的,中间的竟然为marker。。。神啊,只有一条带最亮。。。两边为CDNA模板的PCR产物,左边五个泳道右边五个泳道,最靠近marker的竟然为actin。。。。神呐,竟然什么都没有出来。。右边五个泳道是诱导后的结果, 和左边几个基因一一对应。。。。

为什么会造成如此神奇的情况。。。。marker为什么会跑成这个样子。。。1%的胶TAE
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不孝有三,读博为大!
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

要不就是模板有问题
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
4楼2012-03-26 16:30:31
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查看全部 16 个回答

yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

然后我换了2的胶,然后把电压由150调到50 ,又跑了一次,更诡异的事情发生了,分离的更具体了,好华丽的引物二聚体啊。。。关键是,我已经在25微升的体系中只加了1微升的引物(1μM)。。。。还有这么华丽的二聚体。。。marker还是这个样子。。marker是康为世纪的DM2000.。。。。。。貌似确实是我的目的条带。。。
为什么是这个样子。。。


不孝有三,读博为大!
2楼2012-03-26 16:04:30
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

你的二聚体不急,少点引物能解决
你p的结果不太对吧,actin度没有,体系应该是有问题的
再说这个跑胶,marker跑这样,胶配的不好。第二次电压不高还弯成个那样

你的电泳槽里的buffer是新的吗?
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
3楼2012-03-26 16:29:49
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yidaqunyan: 金币+2, 有帮助, 谢谢你,哥们~ 2012-03-27 15:50:16
貌似是胶做的有问题吧,导致marker的DNA片段都没有分开。。。。
5楼2012-03-27 09:56:03
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