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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 恐怖的PCR电泳条带。。。。。。。。。。
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

[求助] 恐怖的PCR电泳条带。。。。。。。。。。

恐怖的电泳条带，请各位老师看看是如何造成的，中间的竟然为marker。。。神啊，只有一条带最亮。。。两边为CDNA模板的PCR产物，左边五个泳道右边五个泳道，最靠近marker的竟然为actin。。。。神呐，竟然什么都没有出来。。右边五个泳道是诱导后的结果， 和左边几个基因一一对应。。。。

为什么会造成如此神奇的情况。。。。marker为什么会跑成这个样子。。。1%的胶TAE
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不孝有三，读博为大！
1楼 2012-03-26 16:00:18
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
然后我换了2的胶，然后把电压由150调到50 ，又跑了一次，更诡异的事情发生了，分离的更具体了，好华丽的引物二聚体啊。。。关键是，我已经在25微升的体系中只加了1微升的引物（1μM）。。。。还有这么华丽的二聚体。。。marker还是这个样子。。marker是康为世纪的DM2000.。。。。。。貌似确实是我的目的条带。。。
为什么是这个样子。。。
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不孝有三，读博为大！
2楼2012-03-26 16:04:30
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
你的二聚体不急，少点引物能解决
你p的结果不太对吧，actin度没有，体系应该是有问题的
再说这个跑胶，marker跑这样，胶配的不好。第二次电压不高还弯成个那样

你的电泳槽里的buffer是新的吗？
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
3楼2012-03-26 16:29:49
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
要不就是模板有问题
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
4楼2012-03-26 16:30:31
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yidaqunyan: 金币+2, ★有帮助, 谢谢你，哥们~ 2012-03-27 15:50:16
貌似是胶做的有问题吧，导致marker的DNA片段都没有分开。。。。
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5楼2012-03-27 09:56:03
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-26 16:29:49:
你的二聚体不急，少点引物能解决
你p的结果不太对吧，actin度没有，体系应该是有问题的
再说这个跑胶，marker跑这样，胶配的不好。第二次电压不高还弯成个那样

你的电泳槽里的buffer是新的吗？

我的引物已经不少了呀，现在是25微升的体系1μL的引物，引物浓度是10μM。。。

是不是marker不行了？
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不孝有三，读博为大！
6楼2012-03-27 10:41:06
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
关键现在是Actin没有，
maker不行你换一个或借点都行
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
7楼2012-03-27 10:58:25
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yidaqunyan: 金币+2, ★有帮助, 谢谢您，我会注意的 2012-03-27 15:50:36
胶溶解不充分，凝的效果不是很好，跑胶时会导致出现笑脸样条带。配胶和电泳最好都用新的缓冲液。
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8楼2012-03-27 11:38:41
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
引用回帖:
7楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-27 10:58:25:
关键现在是Actin没有，
maker不行你换一个或借点都行

我换了一个新的marker，也是这个样子，。。。。actin不是那个条带，昨天学生和我说错了，不好意思~我今天问了一下，详细的，actin没有问题。。。。
我换的新marker也是这样子。。。怎么回事呢
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不孝有三，读博为大！
9楼2012-03-27 12:45:41
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
引用回帖:
8楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-03-27 11:38:41:
胶溶解不充分，凝的效果不是很好，跑胶时会导致出现笑脸样条带。配胶和电泳最好都用新的缓冲液。

不光是笑脸的问题啊，关键marker也是这个样子，胶应该溶的还好~
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不孝有三，读博为大！
10楼2012-03-27 12:46:55
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