24小时热门版块排行榜    

查看: 3868  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 重叠延伸PCR引物合成求助

最近想把两个DNA片段连起来,想用SOE PCR的方法,看了半天引物设计时都没有搞明白。
假设我的片段A序列为:5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CAC CAT3’

B片段的序列为:5’GACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’

希望的结果为A在前B在后:
5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CACCATGACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’
中间两条引物该怎样设计呢?谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+5, 有帮助 2012-03-26 17:08:32
1.设计2对引物,A5‘ &3’ ;B5‘&3’;A3‘和B5’ 引物有大于15bp的overlap。
2. 分别扩增A和B;
3.A和BPCR 产物等摩尔比混合,共同做模板,用A5‘和B3’扩增。
4.如果扩增效果不好,可以将A5‘和B3’ 向中间移动20左右bp重新设计引物扩增。

可以查看Overlap extension PCR
生活是面镜子~
7楼2012-03-25 14:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

颜英

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+2, 有帮助 2012-03-26 17:07:52
引物的设计不是有软件吗?我的实验也需要设计引物,师姐推荐我用primer premier5这个软件,因为我的目的基因还没确定,所以这个软件我还没用过,不知好不好用呵呵。。。
2楼2012-03-24 13:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 颜英 at 2012-03-24 13:17:14:
引物的设计不是有软件吗?我的实验也需要设计引物,师姐推荐我用primer premier5这个软件,因为我的目的基因还没确定,所以这个软件我还没用过,不知好不好用呵呵。。。

这个我知道,呵呵。连接片段稍微麻烦点。
3楼2012-03-24 14:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+3, 有帮助, 网上的例子也看了,我大概也知道应该是样子,脑子有点笨,具体怎么设计想不明白。 2012-03-24 15:40:45
取A序列的末端20个和B序列的前端20个,分别与A和B进行PCR,再回收产物做模板进行第二次PCR。我只是举个例子,具体的引物你还得仔细分析一下。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
4楼2012-03-24 15:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
请填处理意见