24小时热门版块排行榜    

查看: 3871  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 重叠延伸PCR引物合成求助

最近想把两个DNA片段连起来,想用SOE PCR的方法,看了半天引物设计时都没有搞明白。
假设我的片段A序列为:5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CAC CAT3’

B片段的序列为:5’GACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’

希望的结果为A在前B在后:
5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CACCATGACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’
中间两条引物该怎样设计呢?谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+5, 有帮助 2012-03-26 17:08:32
1.设计2对引物,A5‘ &3’ ;B5‘&3’;A3‘和B5’ 引物有大于15bp的overlap。
2. 分别扩增A和B;
3.A和BPCR 产物等摩尔比混合,共同做模板,用A5‘和B3’扩增。
4.如果扩增效果不好,可以将A5‘和B3’ 向中间移动20左右bp重新设计引物扩增。

可以查看Overlap extension PCR
生活是面镜子~
7楼2012-03-25 14:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

颜英

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+2, 有帮助 2012-03-26 17:07:52
引物的设计不是有软件吗?我的实验也需要设计引物,师姐推荐我用primer premier5这个软件,因为我的目的基因还没确定,所以这个软件我还没用过,不知好不好用呵呵。。。
2楼2012-03-24 13:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 颜英 at 2012-03-24 13:17:14:
引物的设计不是有软件吗?我的实验也需要设计引物,师姐推荐我用primer premier5这个软件,因为我的目的基因还没确定,所以这个软件我还没用过,不知好不好用呵呵。。。

这个我知道,呵呵。连接片段稍微麻烦点。
3楼2012-03-24 14:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小周: 金币+3, 有帮助, 网上的例子也看了,我大概也知道应该是样子,脑子有点笨,具体怎么设计想不明白。 2012-03-24 15:40:45
取A序列的末端20个和B序列的前端20个,分别与A和B进行PCR,再回收产物做模板进行第二次PCR。我只是举个例子,具体的引物你还得仔细分析一下。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
4楼2012-03-24 15:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +3 小李0854 2026-03-16 3/150 2026-03-17 13:40 by 热情沙漠
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见