| 查看: 3822 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
小周铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
重叠延伸PCR引物合成求助
|
|
|
最近想把两个DNA片段连起来，想用SOE PCR的方法，看了半天引物设计时都没有搞明白。 假设我的片段A序列为：5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CAC CAT3’ B片段的序列为：5’GACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’ 希望的结果为A在前B在后： 5’CGA GGATCCAG CATG GAG ACA GAC ACA CTC CTG CTA TGG GTA CTG ........ ACT GGT GACCAT CAT CAC CAT CACCATGACGATGACGACAAGccagtaccccc................agggctcttcggcaaatgtaaGTCGACCAGG3’ 中间两条引物该怎样设计呢？谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有13人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 要合成文献中的引物，但没有表明方向，只给了右引物 和左引物不知怎么合成
已经有5人回复
- 求助！新人，融合PCR一直融不上！！！
已经有24人回复
- 求AS_PCR引物设计
已经有4人回复
- 融合PCR请帮忙看看图片吧
已经有6人回复
- Touch Down PCR
已经有17人回复
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
已经有13人回复
- 如何避免引物二聚体
已经有10人回复
- 3个片段的重叠延伸pcr,pcr反应条件？
已经有7人回复
- 重叠PCR引物，两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事
已经有4人回复
- 求关于Overlap PCR(重叠延伸PCR)的具体实验过程及原理
已经有10人回复
- 求问一个问题，dNTP浓度过低是否在PCR反应中就会形成引物二聚体 谢谢
已经有5人回复
- 求助重叠延伸pcr
已经有5人回复
- 3个片段的重叠pcr能否一步到位？
已经有11人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
- 重叠延伸PCR设计引物
已经有3人回复
- PCR最短可以P多少bp，求大家帮我设计引物！
已经有7人回复
- 【求助/交流】引物合成
已经有17人回复
- 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
已经有17人回复
- 【求助/交流】qrt-pcr引物是否要纯化
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR延伸问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR引物可否不用设计直接用参考文献中的？
已经有7人回复
小周
铁杆木虫 (著名写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 11329.6
- 散金: 20
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1324
- 在线: 560.7小时
- 虫号: 688224
- 注册: 2009-01-05
- 性别: MM
- 专业: 抗体工程学
3楼2012-03-24 14:57:01
2楼2012-03-24 13:17:14
imyting
至尊木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 10216.2
- 散金: 658
- 红花: 5
- 帖子: 805
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 736362
- 注册: 2009-03-31
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-03-24 15:14:51
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
telomerase: 金币+1, 谢谢你的热心应助 2012-03-24 20:36:38
小周: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-26 17:08:10
感谢参与，应助指数 +1
telomerase: 金币+1, 谢谢你的热心应助 2012-03-24 20:36:38
小周: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-26 17:08:10
|
就是搭桥PCR。设计引物时A片段3‘端取20bp左右的碱基，B片段5’端取20个碱基左右，总碱基不要超过50bp（大于50公司合成会比较贵），同时合成该引物反向互补片段。 用这条引物跟B片段的反向引物扩增B片段。再用这条引物反向互补序列为反向引物与A片段的正向引物扩增A片段。 把上一步扩增的A，B产物等摩尔混合再用A片段的正向引物与B片段的反向引物扩增，跑胶，回收你需要的大小的片段。 |
5楼2012-03-24 16:16:08
