| 查看: 2067 | 回复: 13 | |||||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者kether将赠送您 1 个金币 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
[求助]
克隆细菌未知基因
|
|||||
|
各位虫友，你们好！ 如果你们在细菌中发现了一种酶，你们都是怎么克隆它的基因的呢？本人现在就碰到了这个问题，不知接下来该怎么做，请求各位的帮助。 先介绍一下背景：实验室筛选到一株菌，做16s rDNA序列鉴定，结果是芽孢杆菌属；从这株菌中分离纯化出一种酶，做蛋白质N端测序，NCBI比对未发现相同或相似的蛋白。 问题是：这株菌的基因组序列未知，现在想知道这个酶的氨基酸序列或编码这个酶的基因序列，应该怎么做呢？谁能给我一些详细的、可行的答案呢？ 真不知道NCBI里面这么多细菌酶的序列，它们都是怎么由未知变已知的呢？ |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 分子问题及解决方案汇总 | 青椒不辣 辣椒不青 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求芽孢杆菌的通用引物！！！
已经有7人回复
- 从氨基酸序列到基因克隆
已经有7人回复
- 某个细菌的特征性基因是怎样知道的？
已经有6人回复
- 一个基因DNA序列克隆的意义
已经有4人回复
- 大片段基因组DNA克隆，有好方法的进来讨论下
已经有3人回复
- 细菌蛋白质实验
已经有10人回复
- 染色体步移求助
已经有13人回复
- NCBI序列比对问题
已经有6人回复
- 怎么使用NCBI克隆基因？
已经有7人回复
- 提取细菌基因组DNA
已经有9人回复
- 细菌基因文库建立时，克隆非常少！
已经有19人回复
- 如何获得基因组序列
已经有5人回复
- 从头设计引物克隆全长基因
已经有22人回复
- 克隆基因点突变如何解决
已经有4人回复
- 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
已经有21人回复
- 怎么样通过引物序列找目的基因
已经有9人回复
- 关于未知基因克隆
已经有6人回复
- 那些大肠杆菌感受态是Dam+型，基因可被DpnI降解
已经有6人回复
- 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
已经有7人回复
- 如何获得一个酶的基因
已经有5人回复
- 如何从反向或者正向克隆一个（些）基因
已经有8人回复
- 如何从sgn上看懂哪些番茄序列已经克隆了？
已经有3人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】克隆试验中涂布LB平板中的X-ga、IPTG的浓度是多少？
已经有6人回复
- 【求助/交流】克隆基因做过量表达 需要带上3‘端Ploy(A)加尾信号吗？
已经有20人回复
- 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法
已经有14人回复
- 【求助/交流】求助：做基因克隆表达的时候，怎么选基因？
已经有7人回复
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎样克隆目的基因
已经有8人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.3小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 专家啊 2012-03-16 16:42:20
小丹木木: MolEPI+1 2012-03-16 16:42:39
kether: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-22 11:04:09
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 专家啊 2012-03-16 16:42:20
小丹木木: MolEPI+1 2012-03-16 16:42:39
kether: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-22 11:04:09
|
1、16s rDNA序列鉴定是芽孢杆菌属，可以查NCBI已报道的芽孢杆菌基因组，从基因组中找到一些编码你这个酶的基因，然后分析其同源性或保守序列，如果有保守序列，可以利用保守序列去设计引物，PCR获得你的酶的部分编码序列，然后利用染色体步移获得全长基因。 2、已经分离纯化该酶，并做了N端测序，可以利用N端序列设计一条兼并引物，但还缺少一条引物，你可以再做下肽谱，从肽谱的序列中设计另外一个引物，PCR获得你的酶的N端到中间的编码序列，然后利用染色体步移获得3“端序列，获得全长基因。 |
2楼2012-03-16 16:01:52
| 难。。。 |
3楼2012-03-16 17:40:59
sunwei57
木虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 3616.2
- 帖子: 220
- 在线: 82.8小时
- 虫号: 1696471
- 注册: 2012-03-16
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2012-03-16 23:53:53
hmily890404
新虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1376.4
- 红花: 1
- 帖子: 145
- 在线: 20.7小时
- 虫号: 1441321
- 注册: 2011-10-13
- 性别: MM
- 专业: 农业昆虫学
加油哈！5楼2012-03-18 14:25:41
6楼2012-03-19 09:11:05
7楼2012-03-19 09:12:03
8楼2012-03-19 09:12:47
fyxhegtt
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 247.5
- 帖子: 23
- 在线: 44.8小时
- 虫号: 1365701
- 注册: 2011-08-11
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2012-07-03 11:12:53
|
本帖内容被屏蔽 |
10楼2012-07-03 12:00:08
10