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lx19880717金虫 (初入文坛)
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[求助]
pET-28a原核不能表达目的蛋白 已有2人参与
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我在做原核表达的过程中，使用了pET-28a载体，Rosetta（DE3）表达菌株，但是37℃诱导表达后，连包涵体都没有看到，基本没有任何的蛋白表达，所以想请问一下大家，能不能帮我分析一下是什么原因？谢谢。 PS：我的目的蛋白大量重复序列，是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠，如果是这个原因有什么办法可以解决，谢谢。 |
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yanfeier
金虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在线直接就可以分析 如果是稀有密码子的问题 若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点，是否导致你的目的片段的读码框是否发生移位。你也可以考虑你的诱导剂加入的浓度，但是一般的情况下不会是主要的原因。 |
8楼2012-04-06 15:12:09
2楼2012-03-12 16:58:46
lx19880717
金虫 (初入文坛)
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3楼2012-03-12 20:33:16
zhiqiang5070
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4楼2012-03-14 17:49:04
5