应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a原核不能表达目的蛋白
51/1返回列表
查看: 4499  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)

[求助] pET-28a原核不能表达目的蛋白 已有2人参与

我在做原核表达的过程中，使用了pET-28a载体，Rosetta（DE3）表达菌株，但是37℃诱导表达后，连包涵体都没有看到，基本没有任何的蛋白表达，所以想请问一下大家，能不能帮我分析一下是什么原因？谢谢。
PS：我的目的蛋白大量重复序列，是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠，如果是这个原因有什么办法可以解决，谢谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-11 22:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wszhyd at 2012-03-12 16:58:46:
我也遇到楼主一样的问题，选用位点是Nco1 和Xho1 ，也是不表达，帮顶一下，希望高人指点一下。

呵呵，谢谢！
回复此楼
3楼2012-03-12 20:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

wszhyd

金虫 (初入文坛)
我也遇到楼主一样的问题，选用位点是Nco1 和Xho1 ，也是不表达，帮顶一下，希望高人指点一下。
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-12 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-03-14 22:15:48
我跟你一样，也是用的PET28a，不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看，是不是载体构建的问题；菌p，提质粒酶切，测序看看。
2.上游没问题的话，改变诱导条件试试，T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看；
3你的菌有没有问题，可以把构建的重组载体提出来转化到新的感受态试试，我的问题就是这么解决滴
4.换高浓度胶跑跑看看，高浓度提高分辨率。
赞一下(3人) 回复此楼
无善无恶心之体
4楼2012-03-14 17:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-03-14 22:15:57
先分析是否含有大量的稀有密码子，如果没有，应该能表达。

如果稀有密码子太多，这个问题就很难办了，方法有2:换含有稀有密码子的表达宿主；二：对基因进行密码子优化，在表达。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-14 20:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭