24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4803  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)

[求助] pET-28a原核不能表达目的蛋白 已有2人参与

我在做原核表达的过程中,使用了pET-28a载体,Rosetta(DE3)表达菌株,但是37℃诱导表达后,连包涵体都没有看到,基本没有任何的蛋白表达,所以想请问一下大家,能不能帮我分析一下是什么原因?谢谢。
PS:我的目的蛋白大量重复序列,是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠,如果是这个原因有什么办法可以解决,谢谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-03-14 22:15:48
我跟你一样,也是用的PET28a,不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看,是不是载体构建的问题;菌p,提质粒酶切,测序看看。
2.上游没问题的话,改变诱导条件试试,T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看;
3你的菌有没有问题,可以把构建的重组载体提出来转化到新的感受态试试,我的问题就是这么解决滴
4.换高浓度胶跑跑看看,高浓度提高分辨率。
无善无恶心之体
4楼2012-03-14 17:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

wszhyd

金虫 (初入文坛)

我也遇到楼主一样的问题,选用位点是Nco1 和Xho1 ,也是不表达,帮顶一下,希望高人指点一下。
2楼2012-03-12 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by wszhyd at 2012-03-12 16:58:46:
我也遇到楼主一样的问题,选用位点是Nco1 和Xho1 ,也是不表达,帮顶一下,希望高人指点一下。

呵呵,谢谢!
3楼2012-03-12 20:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-03-14 22:15:57
先分析是否含有大量的稀有密码子,如果没有,应该能表达。

如果稀有密码子太多,这个问题就很难办了,方法有2:换含有稀有密码子的表达宿主;二:对基因进行密码子优化,在表达。
5楼2012-03-14 20:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京2,材料与化工308求调剂 +13 熊二想上岸 2026-04-04 14/700 2026-04-06 19:42 by guanxin1001
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +3 李政莹 2026-04-06 3/150 2026-04-06 19:02 by macy2011
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-06 3/150 2026-04-06 15:36 by going home
[考研] 材料专硕322 +11 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 11/550 2026-04-06 14:07 by lqwchd
[考研] 0703化学调剂325分 +12 15771691647 2026-04-04 13/650 2026-04-06 12:00 by lijunpoly
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 10/500 2026-04-06 09:35 by jp9609
[考研] 求调剂,一志愿郑州大学材料与化工专硕,英二数二342分,求老师收留 +19 v12abo 2026-04-02 21/1050 2026-04-06 09:29 by 蓝云思雨
[考研] 材料专硕283求调剂 +17 试试看呗 2026-04-04 18/900 2026-04-06 09:24 by 286640313
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +4 zhouzhen654 2026-04-03 4/200 2026-04-04 18:10 by 猪会飞
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 0710生物学,325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 求调剂,一志愿北林食品与营养095500,301分,已过六级,有科研经历 +4 快乐储蓄罐 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:26 by JourneyLucky
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
信息提示
请填处理意见