应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-28a原核不能表达目的蛋白
181/2返回列表12下一页
查看: 4704  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lx19880717

金虫 (初入文坛)

[求助] pET-28a原核不能表达目的蛋白 已有2人参与

我在做原核表达的过程中，使用了pET-28a载体，Rosetta（DE3）表达菌株，但是37℃诱导表达后，连包涵体都没有看到，基本没有任何的蛋白表达，所以想请问一下大家，能不能帮我分析一下是什么原因？谢谢。
PS：我的目的蛋白大量重复序列，是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠，如果是这个原因有什么办法可以解决，谢谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-11 22:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-03-14 22:15:48
我跟你一样，也是用的PET28a，不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看，是不是载体构建的问题；菌p，提质粒酶切，测序看看。
2.上游没问题的话，改变诱导条件试试，T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看；
3你的菌有没有问题，可以把构建的重组载体提出来转化到新的感受态试试，我的问题就是这么解决滴
4.换高浓度胶跑跑看看，高浓度提高分辨率。
赞一下(3人) 回复此楼
无善无恶心之体
4楼2012-03-14 17:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wszhyd

金虫 (初入文坛)
我也遇到楼主一样的问题，选用位点是Nco1 和Xho1 ，也是不表达，帮顶一下，希望高人指点一下。
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-12 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wszhyd at 2012-03-12 16:58:46:
我也遇到楼主一样的问题，选用位点是Nco1 和Xho1 ，也是不表达，帮顶一下，希望高人指点一下。

呵呵，谢谢！
回复此楼
3楼2012-03-12 20:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-03-14 22:15:57
先分析是否含有大量的稀有密码子，如果没有，应该能表达。

如果稀有密码子太多，这个问题就很难办了，方法有2:换含有稀有密码子的表达宿主；二：对基因进行密码子优化，在表达。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-14 20:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pwj

银虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励下 2012-03-14 22:16:09
试试TB培养基，以前我也遇到同样问题，换了TB培养基就好了！希望你能成功
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-14 21:50:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 螺旋技术 at 2012-03-14 20:00:21:
先分析是否含有大量的稀有密码子，如果没有，应该能表达。

如果稀有密码子太多，这个问题就很难办了，方法有2:换含有稀有密码子的表达宿主；二：对基因进行密码子优化，在表达。

请问哪个软件或网站能分析稀有密码子？烦请告知一下哈，谢谢。
赞一下 回复此楼
Things change, people grow.
7楼2012-04-06 12:24:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 胡乱走走2011 at 2012-04-06 12:24:56:
请问哪个软件或网站能分析稀有密码子？烦请告知一下哈，谢谢。

http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在线直接就可以分析
如果是稀有密码子的问题  若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点，是否导致你的目的片段的读码框是否发生移位。你也可以考虑你的诱导剂加入的浓度，但是一般的情况下不会是主要的原因。
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-06 15:12:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yanfeier at 2012-04-06 15:12:09:
http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在线直接就可以分析
如果是稀有密码子的问题  若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点，是否导致你的目的片段的读码框是否发生 ...

嗯非常感谢。
回复此楼
Things change, people grow.
9楼2012-04-07 08:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的是BL21这个菌株，诱导包涵体蛋白可以使用低温18℃左右
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-10 10:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lx19880717 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:19 by Demonsssss
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭