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lx19880717

金虫 (初入文坛)

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[求助] pET-28a原核不能表达目的蛋白已有2人参与

我在做原核表达的过程中，使用了pET-28a载体，Rosetta（DE3）表达菌株，但是37℃诱导表达后，连包涵体都没有看到，基本没有任何的蛋白表达，所以想请问一下大家，能不能帮我分析一下是什么原因？谢谢。
PS：我的目的蛋白大量重复序列，是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠，如果是这个原因有什么办法可以解决，谢谢。

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1楼 2012-03-11 22:08:56

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yanfeier

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 胡乱走走2011 at 2012-04-06 12:24:56:
请问哪个软件或网站能分析稀有密码子？烦请告知一下哈，谢谢。

http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在线直接就可以分析
如果是稀有密码子的问题若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点，是否导致你的目的片段的读码框是否发生移位。你也可以考虑你的诱导剂加入的浓度，但是一般的情况下不会是主要的原因。

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