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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳问题
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一笑而过0987

铜虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳问题

最近做的琼脂糖凝胶电泳实验出了问题很苦恼，marker条带清晰，目的条带有的清晰有的没有，引物二聚体非常多，比目标条带还清楚。
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1楼 2012-03-01 12:17:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-01 17:04:12
目的条带不清晰可能是你的PCR产物浓度低，可以加大上样量看看到底有没有目的条带。你可以把PCR体系中引物量降低，你的引物加的过多了，不过也有可能是你的引物本身就容易形成二聚体，先降低量看看吧。由你的描述看，你的
PCR体系或扩增程序需优化。
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坚持就是胜利
2楼2012-03-01 12:28:01
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紫菱Kitty

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是引物设计出错了啊？一般电泳之前都是PCR之类的，会不会是P错了？如果你是提取基因后电泳，那就是你没提出来。因为我记得基因电泳的灵敏度还是很高的，所以我觉得不存在浓度过低的问题。感觉只要有就能跑出来电泳。
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梦随风万里，几度洪辰来去。人面桃花长相忆。又是一年春华成秋碧，莫叹明月笑多情。
10楼2012-03-02 10:42:49
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一笑而过0987

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by manli881107 at 2012-12-18 10:41:27
你好楼主，我最近也出现了你同样的问题～我跑了一下DNA浓度，很好很亮，可是PCR产物就是很弱，甚至没有，二聚体也很多很亮，我找不到是什么原因，请问你是怎么解决这个问题的呢？急！

实验做完了，我忘了当时是怎么解决的了，当时尝试了很多办法，温度梯度还有降落法。还换了试剂。
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14楼2012-12-20 23:04:38
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普通回帖

一笑而过0987

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-03-01 12:28:01:
目的条带不清晰可能是你的PCR产物浓度低，可以加大上样量看看到底有没有目的条带。你可以把PCR体系中引物量降低，你的引物加的过多了，不过也有可能是你的引物本身就容易形成二聚体，先降低量看看吧。由你的描述看 ...

加样量增加了二倍，还是和原来一样。
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3楼2012-03-01 18:01:20
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一笑而过0987

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一笑而过0987 at 2012-03-01 18:01:20:
加样量增加了二倍，还是和原来一样。

按照同样的体系，之前做过，结果还挺好的，最近就这样了。
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4楼2012-03-01 18:02:54
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把东西都换一遍重新试试呢 要是再不行就重新设计一下引物啊
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5楼2012-03-01 19:54:21
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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6楼2012-03-02 09:21:03
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一笑而过0987

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 198903133397 at 2012-03-02 09:21:03:
体系是否和原来一样，不同体系之间也有差异

都是一样的，前一天好好地，后一天就这么奇怪了。
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7楼2012-03-02 09:31:06
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如你说的体系一直都是这样的话，那就考虑是你的模板出问题咯，比如被污染了
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8楼2012-03-02 09:34:56
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一笑而过0987

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-03-02 09:34:56:
如你说的体系一直都是这样的话，那就考虑是你的模板出问题咯，比如被污染了

一会把模板跑一下，看看
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9楼2012-03-02 09:53:47
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