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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】琼脂糖电泳时EB用量问题
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】琼脂糖电泳时EB用量问题 已有7人参与

做琼脂糖凝胶电泳检测DNA时，在琼脂糖凝胶中加多少量的EB？我定的EB是12g/ml的.我要稀释到多少浓度，加多少到胶中。大概的量都可以。谢了
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1楼 2010-10-12 15:00:40
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
讲的是泡胶。全部浸泡。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
2楼2010-10-12 15:07:16
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
我木有配过EB  不晓得浓度  但是我们这边一大板胶（100ml）是加5微升就够了，
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会不会偶尔也会想起我....
3楼2010-10-12 15:10:55
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
半滴就足够了啊。
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4楼2010-10-12 15:14:33
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jxl2819

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-12 15:00:40:
做琼脂糖凝胶电泳检测DNA时，在琼脂糖凝胶中加多少量的EB？我定的EB是12g/ml的.我要稀释到多少浓度，加多少到胶中。大概的量都可以。谢了

可以不用稀释吧，直接用小枪头点一下，然后混在倒好平板但还没有凝固的胶里，然后混匀，就可以了。
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long-l-j
5楼2010-10-12 15:36:59
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流~ 2010-10-12 18:26:08
终浓度0.5ug/ml就够

你的EB是EB是12g/ml的？写错了吧，12mg/ml还差不多

一般就是粘上一滴就行，或者吸上一两微升足够了，不用太精确
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6楼2010-10-12 15:41:27
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jxl2819 at 2010-10-12 15:36:59:



可以不用稀释吧，直接用小枪头点一下，然后混在倒好平板但还没有凝固的胶里，然后混匀，就可以了。

恩，好的，谢谢，你知不知道垂直电泳槽可以不可以做琼脂糖凝胶电泳？
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7楼2010-10-12 15:50:23
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-12 15:41:27:
终浓度0.5ug/ml就够

你的EB是EB是12g/ml的？写错了吧，12mg/ml还差不多

一般就是粘上一滴就行，或者吸上一两微升足够了，不用太精确

好的，谢谢，请问你知道不知道垂直电泳槽可不可以做琼脂糖凝胶电泳？
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8楼2010-10-12 15:52:27
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3):欢迎发帖交流！ 2010-10-12 19:36:14
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-12 15:52:27:

好的，谢谢，请问你知道不知道垂直电泳槽可不可以做琼脂糖凝胶电泳？

这个真没做过，貌似不行吧
一是凝胶强度可能有问题，那么薄的琼脂糖胶应该很不结实

二是电压电流可能没法控制，电压低了跑不动，电压高了烧了

三是长时间电泳导致的EB迁移不能忽略，除非电泳后染胶，板子太大的话不方便吧，琼脂糖银染？没见过诶。。。。。。。。

有必要用垂直槽跑琼脂糖么？大片段水平槽跑很好啊，小片段琼脂糖也分不开，还是要PAGE
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9楼2010-10-12 15:58:18
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jxl2819

铜虫 (初入文坛)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
[quote]Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-12 15:50:23:

恩，好的，谢谢，你知不知道垂直电泳槽可以不可以做琼脂糖凝胶电泳？ [/quote

我也没有听说过用垂直电泳槽跑琼脂糖凝胶电泳的，垂直电泳槽太薄了。
    我只知道用聚丙烯酰胺凝胶电泳高于琼脂糖凝胶电泳，如果你的DNA小于1Kb，或者想做DNA序列分析的话倒可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳
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long-l-j
10楼2010-10-12 16:09:58
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