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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 考马斯亮蓝菌体总蛋白浓度相关问题
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小辉辉
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1楼 2012-02-29 22:55:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
裂解之后得到的蛋白质浓度很大的，可以稀释之后再测定,如果不放心，就用缓冲液来稀释，就能把干扰因素降低了。

对于标准曲线来说不是毫无上限和下限的，可能是试剂灵敏度不够、仪器不能分辨颜色深度、显色剂过少，所以你要自己摸索一下。

考马斯亮蓝测蛋白在测OD的时候，用蒸馏水和考马斯亮蓝染液的混合物溶液来调零，因为试剂本身也是有吸光度的。

BSA的配制，我没想到那么多，是用水而已。
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huichenshen
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-03-02 00:26:52
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xhjggl

木虫 (正式写手)
可以到上海生工网站上下载产品编号为SK3031  SK3041  SK3071的说明书看看
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huichenshen
7楼2012-03-03 13:22:41
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
看天(金币+3): 鼓励交流 2012-03-01 15:27:14
请先看旧帖，宗家大小姐日向雏田

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3528663&page=1#pid736159
[求助]考马斯亮蓝法测蛋白含量时吸光度A595nm为负值！！！求助


http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3315351&page=3#pid1887491
求助！关于考马斯亮蓝制作标准蛋白曲线的问题，麻烦各位进来看下！
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3315351&page=1#pid1481204
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2楼2012-03-01 01:37:19
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3楼2012-03-01 10:30:51
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4楼2012-03-01 23:09:53
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6楼2012-03-03 10:10:43
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我刚加入论坛的时候还选择应助，后来就不再选了，因为我不确定自己的回帖是否有价值，而且我也不缺金币。
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8楼2012-03-04 00:26:02
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9楼2012-03-04 21:33:32
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huichenshen(金币+8): 非常感谢！ 2012-03-08 22:06:08
对于第一个问题，既然提到了超声破碎，当然用这个时要注意破碎的功率和时间；
2、缓冲液的PH对于蛋白质而言通常用到PBS，Trise-HCl，碳酸盐缓冲液等，当然也要看你的目标蛋白的Pi值。
3考马斯测蛋白浓度，校零使用2.5ml的考马斯和0.5的水（总体积3ml）进行校零的。
4、考马斯测定蛋白浓度范围在0-150ug/ml，超出这个范围就不准确了，当然这个方法也有其本事的偏差，我们自己测的时候有时候也不成倍数关系。
5、对于BSA而言，作为标准曲线的制作，我们通常是用水配制的，我是第一次听见要用NaCl配制的，恕我才疏学浅！
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
10楼2012-03-05 12:53:40
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