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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)

[求助] 做血浆药物标准曲线，纵坐标的值代表的浓度指的是什么？

做血浆药物标准曲线，纵坐标的值是指的原来血浆中的药物的浓度，还是指血浆处理之后溶液中的药物浓度，或者是进样液浓度乘以进样体积的值？
比如：200uL空白血浆加入10uL标准溶液（1ug/ml）,液液萃取，挥干之后，用100uL甲醇复溶，HPLC分析进样量为20uL，进行分析。那么这种条件下，此点溶液的浓度应该是多少呢？是50ng/ml（原血浆加药后浓度），还是100ng/mL（100uL甲醇复溶后浓度），还是100ng/ml*20uL/1000=2ng（溶液浓度乘以进样体积）呢？。
希望各位大侠给予指点，比较纠结
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边走边学，边学边用，边用边问
1楼 2012-03-27 21:44:13
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流，、 2012-03-28 08:40:50
好久没顾得上给大家讨论了。你全部理解错了，横坐标才代表浓度，纵坐标代表的是你所测化合物的峰面积（严谨的方法是所测化合物的峰面积与内标的峰面积的比值，其中内标必须与所测化合物的结构类似，尤其在质谱检测器中必须用比值表示纵坐标）。而你的横坐标的浓度应该是10uL*1ug/ml*(200/100)/210uL.
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2楼2012-03-27 22:24:22
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zhangxuan200

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-03-28 08:40:55
横坐标为待测体内浓度与内标体内浓度比值，纵坐标代表待测物和内标物的响应比值。待测物体内浓度为0.05ug/ml，稀释倍数20倍，不是进样时的标液浓度。注意要区别体内浓度和体外标液浓度的算法是不同的。
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3楼2012-03-28 08:35:37
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 破土草儿 at 2012-03-27 22:24:22:
好久没顾得上给大家讨论了。你全部理解错了，横坐标才代表浓度，纵坐标代表的是你所测化合物的峰面积（严谨的方法是所测化合物的峰面积与内标的峰面积的比值，其中内标必须与所测化合物的结构类似，尤其在质谱检测 ...

谢谢你的回答，看了你的回复，我查看了下文献，的确是横坐标代表浓度，但是看你给出的回答，为什么中间要乘以（200/100）呢？是表示溶液浓缩了2倍吗？不是很明白，希望给予指导
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边走边学，边学边用，边用边问
4楼2012-03-29 21:15:19
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2012-03-28 08:35:37:
横坐标为待测体内浓度与内标体内浓度比值，纵坐标代表待测物和内标物的响应比值。待测物体内浓度为0.05ug/ml，稀释倍数20倍，不是进样时的标液浓度。注意要区别体内浓度和体外标液浓度的算法是不同的。

谢谢您的回复，您的意思是横坐标表示的是血浆溶液中药物的浓度，而不是处理之后的甲醇溶液中药物浓度对吧？
如果我用处理之后的甲醇溶液进样液相分析，确定其检测限，是不是也要用血浆中的药物浓度来表示呢？例如：某浓度下峰高是信噪比的3倍，血浆中药物浓度100ng/mL,同上述方法处理之后，药物浓缩了2倍，变成了200ng/ml,那么此条件下，检测限是100ng/ml,还是200ng/ml呢？
因为本实验室没人做过这方面的实验，有点迷糊，谢谢指导
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边走边学，边学边用，边用边问
5楼2012-03-29 21:25:07
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zhangxuan200

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xiaoqiu2010: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-03-30 14:10:02
LLOQ 是100ng/ml，不是200ng/ml
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6楼2012-03-30 08:25:48
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破土草儿

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoqiu2010 at 2012-03-29 21:15:19:
谢谢你的回答，看了你的回复，我查看了下文献，的确是横坐标代表浓度，但是看你给出的回答，为什么中间要乘以（200/100）呢？是表示溶液浓缩了2倍吗？不是很明白，希望给予指导

哦，我写错了。应该是1*(10/100)ug/ml,只要保证前后进样的体积一样，就可以不用带入进样体积计算，直接用标准液的浓度乘以稀释倍数的倒数（也就是开始的10ul除以100ul）。不知道我表述明白没有。
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7楼2012-04-01 08:32:12
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chengfei0611

银虫 (初入文坛)
做血浆标曲时，横坐标表示浓度，这个浓度一般是指空白血浆中的药物浓度=标准溶液量（ug）/(血浆+内标+标准溶液）三者体积（ml）之和；而纵坐标表示的是标准系列溶液的峰面积/内标的峰面积。然后用峰面积的比值对浓度作图，得到标准曲线。
    这里不需要考虑处理过程中所加沉淀剂或萃取剂对溶液体积的影响，因为最终你进行样品测定时，需要知道的也是血浆基质中的药物浓度，而非最后注入液相的浓度。
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8楼2012-04-10 12:58:51
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328121

木虫 (小有名气)
标准曲线上的浓度是相当于对照品在血浆中的浓度，其实就是把对照品当做溶质，血浆当成载体，对照品的量除以血浆体积，得到的就是药时曲线的浓度，不是按照最终复溶后的体积算。
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You`ll Never Walk Alone.
9楼2012-05-08 10:24:46
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lxj_win

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 328121 at 2012-05-08 10:24:46
标准曲线上的浓度是相当于对照品在血浆中的浓度，其实就是把对照品当做溶质，血浆当成载体，对照品的量除以血浆体积，得到的就是药时曲线的浓度，不是按照最终复溶后的体积算。

你好，不用考虑加内标的体积么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2015-11-09 21:14:01
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