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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教一个关于测序结果的问题
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wawjp

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教一个关于测序结果的问题

年前做了一个测序，结果很奇怪，虽然测序结果是测到了，但是结果和目的片段进行比对，发现测序结果分为两部分，前300正是自己的目的片段，而后300则是目的片段的反向序列，也就是说一个测序结果上出现了两个目的片段，一个正向，一个反向，不知道是怎么一回事，请教各位高手，同时祝大家元宵节快乐
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1楼2012-02-06 10:30:33
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回帖置顶 ( 共有1个 )

小靳-兰兰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 条理清楚，简明扼要 2012-06-11 13:45:54
测序要求分四种：（1）正向：测的是DNA正链，模板链 （2）反向：测的是与DNA正链互补的反链 （3）双向：正向、反向都测（4）测通：DNA片段小于750bp时，一个反应就可以测通，对于DNA片段大于750bp时 ，由于受现在技术及仪器条件限制，所以就需要根据已测的序列重新设计和合成引物，接着往下测序。
你的应是双向测序结果，将测序结果做个assemble,拼接，会发现正反两个结果完全重合，即是你目的片段
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19楼2012-06-11 00:02:59
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-06 18:15:48
确定你的连接产物大小是对的吗？还有连上的产物是你目的的两倍啊
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2楼2012-02-06 11:12:46
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wzqno

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-06 18:15:54
你得说清楚你是用的什么载体，TA克隆还是酶切后连的，不然不好分析
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3楼2012-02-06 11:27:40
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wawjp

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by bst5 at 2012-02-06 11:12:46:
确定你的连接产物大小是对的吗？还有连上的产物是你目的的两倍啊

应该是没有问题的
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4楼2012-02-06 11:41:07
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wawjp

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wzqno at 2012-02-06 11:27:40:
你得说清楚你是用的什么载体，TA克隆还是酶切后连的，不然不好分析

我是PCR产物来的，麻烦了
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5楼2012-02-06 11:41:37
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by wawjp at 2012-02-06 11:41:37:
我是PCR产物来的，麻烦了

PCR产物直接测序？？还是PCR产物连到T载体上测序？
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6楼2012-02-06 13:49:43
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wawjp

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wzqno at 2012-02-06 13:49:43:
PCR产物直接测序？？还是PCR产物连到T载体上测序？

PCR产物直接测序
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7楼2012-02-06 13:56:57
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Charles-glh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助！ 2012-02-06 22:30:22
测序是分开测的，正反引物按照一个方向测序的，你的结果应该是对的！
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8楼2012-02-06 17:31:37
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Rick001

铁杆木虫 (职业作家)

钓鱼岛环保首席秘书
有意思。关注一下，期待答案
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☆☆☆想开了，便能走出去☆☆☆
9楼2012-02-06 18:42:43
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c3024034

银虫 (正式写手)
你的PCR反应引物设计有无问题啊？
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10楼2012-02-06 18:51:50
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