【答案】应助回帖

11楼2012-02-07 21:48:26

smilerion

银虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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具体几条引物测的，一个测序结果的前后不一样么，你的片段就300么？

12楼2012-02-07 23:33:56

whb21

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★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流！ 2012-02-08 18:22:19

测序公司测序方式有一种叫双向测通，就是正向、反向都测了，但是发回来的结果不会是正向反向序列连接在一起的....
建议你联系一下公司或者考虑一下是不是载体构建出错了...

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13楼2012-02-08 15:01:40

空谷幽风

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西瓜(金币+2, 专家考核): 有条理啊 2012-02-08 18:21:51

有几个问题需要问楼主：
1.你的PCR产物有多长
2.用几条引物测序
3.是在同一条引物的测序结果上出现了这个问题吗

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

14楼2012-02-08 17:18:26

wawjp

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楼: Originally posted by Charles-glh at 2012-02-06 17:31:37:
测序是分开测的，正反引物按照一个方向测序的，你的结果应该是对的！

应该不是吧，我先用了上游测序出现了这个结果，后来使用下游测，结果良好，并没有出现这种情况

15楼2012-02-10 13:45:00

wawjp

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楼: Originally posted by c3024034 at 2012-02-06 18:51:50:
你的PCR反应引物设计有无问题啊？

我也在怀疑这个，但是要是引物有多个结合位点的话测序结果不应该是良好啊，我是用oligo6.0设计的，设计上看不出啥问题来

16楼2012-02-10 13:46:08

steler_ly

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亲爱的，极有可能是你做连接的时候，连进两个片段，而这两个片段刚好反向相连。。。

17楼2012-02-10 14:01:34

ljw796

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引物设计的问题，或者换个测序公司试试

18楼2012-02-11 09:37:17

小靳-兰兰

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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 条理清楚，简明扼要 2012-06-11 13:45:54

测序要求分四种：（1）正向：测的是DNA正链，模板链（2）反向：测的是与DNA正链互补的反链（3）双向：正向、反向都测（4）测通：DNA片段小于750bp时，一个反应就可以测通，对于DNA片段大于750bp时，由于受现在技术及仪器条件限制，所以就需要根据已测的序列重新设计和合成引物，接着往下测序。
你的应是双向测序结果，将测序结果做个assemble,拼接，会发现正反两个结果完全重合，即是你目的片段

19楼2012-06-11 00:02:59

ma_xiaowen

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我也正在研究当中

20楼2012-07-09 14:56:25