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mxlo.o

金虫 (正式写手)

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你的目的片段多长啊
11楼2012-02-07 21:48:26
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smilerion

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
具体几条引物测的,一个测序结果的前后不一样么,你的片段就300么?
12楼2012-02-07 23:33:56
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流! 2012-02-08 18:22:19
测序公司测序方式有一种叫双向测通,就是正向、反向都测了,但是发回来的结果不会是正向反向序列连接在一起的....
建议你联系一下公司或者考虑一下是不是载体构建出错了...
13楼2012-02-08 15:01:40
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜(金币+2, 专家考核): 有条理啊 2012-02-08 18:21:51
有几个问题需要问楼主:
1.你的PCR产物有多长
2.用几条引物测序
3.是在同一条引物的测序结果上出现了这个问题吗
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
14楼2012-02-08 17:18:26
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wawjp

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by Charles-glh at 2012-02-06 17:31:37:
测序是分开测的,正反引物按照一个方向测序的,你的结果应该是对的!

应该不是吧,我先用了上游测序出现了这个结果,后来使用下游测,结果良好,并没有出现这种情况
15楼2012-02-10 13:45:00
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wawjp

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by c3024034 at 2012-02-06 18:51:50:
你的PCR反应引物设计有无问题啊?

我也在怀疑这个,但是要是引物有多个结合位点的话测序结果不应该是良好啊,我是用oligo6.0设计的,设计上看不出啥问题来
16楼2012-02-10 13:46:08
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steler_ly

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
亲爱的,极有可能是你做连接的时候,连进两个片段,而这两个片段刚好反向相连。。。
17楼2012-02-10 14:01:34
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ljw796

新虫 (初入文坛)

引物设计的问题,或者换个测序公司试试
18楼2012-02-11 09:37:17
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小靳-兰兰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 条理清楚,简明扼要 2012-06-11 13:45:54
测序要求分四种:(1)正向:测的是DNA正链,模板链 (2)反向:测的是与DNA正链互补的反链 (3)双向:正向、反向都测(4)测通:DNA片段小于750bp时,一个反应就可以测通,对于DNA片段大于750bp时 ,由于受现在技术及仪器条件限制,所以就需要根据已测的序列重新设计和合成引物,接着往下测序。
你的应是双向测序结果,将测序结果做个assemble,拼接,会发现正反两个结果完全重合,即是你目的片段
19楼2012-06-11 00:02:59
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ma_xiaowen

木虫 (正式写手)

我也正在研究当中
20楼2012-07-09 14:56:25
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