| 查看: 2513 | 回复: 7 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
fanger版主
|
[交流]
测酶活前处理心得 已有6人参与
|
|||
|
一般一瓶动物细胞长满后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下来，4℃，1000转，6~10min 离心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000转，6~10min 离心，倒掉上清（如果暂时不要测酶活的话，直接将离心后的沉淀冻于-80℃，可保存2~3个月，用时直接加生理盐水进行后处理即可）。再用生理盐水重新分散，枪头打匀，超声波破碎，一般一瓶动物细胞加1mL生理盐水，一般用总工作时间300S,，开5S，停10S，槽温度稍设高点，一般50℃（此温度与你EP管内的温度无关，但是温度探针伸到反应体系中的温度就得设低些），20%功率。破碎完后4℃，12000转，5min 离心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀应该是很少的，如果还很多，重新打散后加时间再破碎）。将上清取出摇匀后检测蛋白浓度，我用的是考马斯亮蓝+BSA法。然后蛋白用于即时检测，暂时不用的话立刻冻在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好当天检测，不然活性会受到影响。 [ Last edited by silicare on 2014-5-14 at 18:30 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 酶类相关 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
lixingliang» 猜你喜欢
309分085801求调剂
已经有7人回复
-
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）
已经有3人回复
-
求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过
已经有3人回复
-
环境工程 085701，267求调剂
已经有14人回复
-
308求调剂
已经有12人回复
-
求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319
已经有21人回复
-
311求调剂
已经有8人回复
-
294分080500材料科学与工程求调剂
已经有13人回复
-
288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工
已经有19人回复
-
288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行
已经有23人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶活测定中的缓冲液
已经有4人回复
- 怎样测定固定化酶的酶活？
已经有11人回复
- 脱羧酶酶活测定
已经有3人回复
- 测定酶活，同一个样品同样的标准，我测得就比别人偏低，不知道为什么？
已经有6人回复
- 测酶活性时总蛋白的测定
已经有12人回复
- 几丁质酶测酶活的方法
已经有29人回复
- 酶活测定时，为什么不加酶液的对照吸光度变化很快，而加了酶液的样品反而非常稳定？
已经有10人回复
- 滤纸酶活测定时酶液稀释倍数如何确定
已经有4人回复
- 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
已经有22人回复
- 分光光度计测定酶活中的问题
已经有9人回复
- 已取得基因反向测序结果，要先如何处理再上blast比对？
已经有4人回复
- 测CAT酶活，急求指导~~~大家帮帮忙吧，感激不尽~~~~
已经有13人回复
- 纯酶不透析直接测酶活有影响吗
已经有12人回复
- 图例请教聚合酶（Taq酶)外切和内切具体怎么起作用的，急！
已经有11人回复
- DNS法测酶活性
已经有4人回复
- 测定米曲霉酶活为负值
已经有16人回复
- 用分光计怎么样测酶活?
已经有6人回复
- 【求助/交流】测定酶活的时候，多长时间记一次吸光度？需要记几分钟？ 怎么计算酶活�
已经有3人回复
- 【求助/交流】pNPG测酶活
已经有17人回复
- 【求助/交流】粗酶液酶活测定
已经有28人回复
- 以NADH为底物的酶的酶活测定
已经有10人回复
fanger
实习版主
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 263.9
- 散金: 188
- 红花: 6
- 帖子: 148
- 在线: 113.3小时
- 虫号: 1242280
- 注册: 2011-03-23
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2014-05-14 15:28:15
lixingliang
专家顾问
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 383.5
- 散金: 100
- 帖子: 181
- 在线: 41.6小时
- 虫号: 1254305
- 注册: 2011-04-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2012-01-08 08:04:11
zxhong
主管区长
 |
3楼2012-01-13 10:34:48
bjfwjp
超级版主
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1594.3
- 散金: 82
- 红花: 1
- 帖子: 1725
- 在线: 123小时
- 虫号: 681976
- 注册: 2008-12-26
- 性别: GG
- 专业: 环境工程
4楼2012-01-16 13:52:39
