应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 测酶活前处理心得
51/1返回列表
查看: 2310  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fanger

银虫 (小有名气)

[交流] 测酶活前处理心得已有6人参与

一般一瓶动物细胞长满后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下来，4℃，1000转，6~10min 离心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000转，6~10min 离心，倒掉上清（如果暂时不要测酶活的话，直接将离心后的沉淀冻于-80℃，可保存2~3个月，用时直接加生理盐水进行后处理即可）。再用生理盐水重新分散，枪头打匀，超声波破碎，一般一瓶动物细胞加1mL生理盐水，一般用总工作时间300S,，开5S，停10S，槽温度稍设高点，一般50℃（此温度与你EP管内的温度无关，但是温度探针伸到反应体系中的温度就得设低些），20%功率。破碎完后4℃，12000转，5min 离心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀应该是很少的，如果还很多，重新打散后加时间再破碎）。将上清取出摇匀后检测蛋白浓度，我用的是考马斯亮蓝+BSA法。然后蛋白用于即时检测，暂时不用的话立刻冻在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好当天检测，不然活性会受到影响。

[ Last edited by silicare on 2014-5-14 at 18:30 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

酶类相关

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lixingliang lyyimi

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做好自己！
1楼2012-01-06 14:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuiwenchao

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能问一下你超声破碎的体积吗
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-13 21:34:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lixingliang

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
参考一下，很有价值啊
赞一下(1人) 回复此楼
我不管你看起看不起我，我都是个演员
2楼2012-01-08 08:04:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxhong
3楼2012-01-13 10:34:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bjfwjp

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
实用的方法，非常感谢。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-01-16 13:52:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭