| 查看: 2479 | 回复: 7 | ||||
[交流]
测酶活前处理心得 已有6人参与
|
|
一般一瓶动物细胞长满后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下来，4℃，1000转，6~10min 离心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000转，6~10min 离心，倒掉上清（如果暂时不要测酶活的话，直接将离心后的沉淀冻于-80℃，可保存2~3个月，用时直接加生理盐水进行后处理即可）。再用生理盐水重新分散，枪头打匀，超声波破碎，一般一瓶动物细胞加1mL生理盐水，一般用总工作时间300S,，开5S，停10S，槽温度稍设高点，一般50℃（此温度与你EP管内的温度无关，但是温度探针伸到反应体系中的温度就得设低些），20%功率。破碎完后4℃，12000转，5min 离心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀应该是很少的，如果还很多，重新打散后加时间再破碎）。将上清取出摇匀后检测蛋白浓度，我用的是考马斯亮蓝+BSA法。然后蛋白用于即时检测，暂时不用的话立刻冻在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好当天检测，不然活性会受到影响。 [ Last edited by silicare on 2014-5-14 at 18:30 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 酶类相关 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
lixingliang» 猜你喜欢
308求调剂
已经有4人回复
-
NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗
已经有14人回复
-
材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐
已经有6人回复
-
化学调剂0703
已经有7人回复
-
327求调剂
已经有11人回复
-
调剂
已经有8人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有7人回复
-
伙伴们，祝我生日快乐吧
已经有24人回复
-
中科院材料273求调剂
已经有3人回复
-
材料工程专硕274一志愿211求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶活测定中的缓冲液
已经有4人回复
- 怎样测定固定化酶的酶活？
已经有11人回复
- 脱羧酶酶活测定
已经有3人回复
- 测定酶活，同一个样品同样的标准，我测得就比别人偏低，不知道为什么？
已经有6人回复
- 测酶活性时总蛋白的测定
已经有12人回复
- 几丁质酶测酶活的方法
已经有29人回复
- 酶活测定时，为什么不加酶液的对照吸光度变化很快，而加了酶液的样品反而非常稳定？
已经有10人回复
- 滤纸酶活测定时酶液稀释倍数如何确定
已经有4人回复
- 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
已经有22人回复
- 分光光度计测定酶活中的问题
已经有9人回复
- 已取得基因反向测序结果，要先如何处理再上blast比对？
已经有4人回复
- 测CAT酶活，急求指导~~~大家帮帮忙吧，感激不尽~~~~
已经有13人回复
- 纯酶不透析直接测酶活有影响吗
已经有12人回复
- 图例请教聚合酶（Taq酶)外切和内切具体怎么起作用的，急！
已经有11人回复
- DNS法测酶活性
已经有4人回复
- 测定米曲霉酶活为负值
已经有16人回复
- 用分光计怎么样测酶活?
已经有6人回复
- 【求助/交流】测定酶活的时候，多长时间记一次吸光度？需要记几分钟？ 怎么计算酶活�
已经有3人回复
- 【求助/交流】pNPG测酶活
已经有17人回复
- 【求助/交流】粗酶液酶活测定
已经有28人回复
- 以NADH为底物的酶的酶活测定
已经有10人回复
lixingliang
新虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 383.5
- 散金: 100
- 帖子: 181
- 在线: 41.6小时
- 虫号: 1254305
- 注册: 2011-04-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2012-01-08 08:04:11
 |
3楼2012-01-13 10:34:48
bjfwjp
银虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1594.3
- 散金: 82
- 红花: 1
- 帖子: 1725
- 在线: 123小时
- 虫号: 681976
- 注册: 2008-12-26
- 性别: GG
- 专业: 环境工程
4楼2012-01-16 13:52:39
 |
5楼2012-07-20 23:37:52
6楼2013-06-21 17:54:51
cuiwenchao
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5183.4
- 红花: 1
- 帖子: 74
- 在线: 110小时
- 虫号: 1923629
- 注册: 2012-08-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
7楼2014-05-13 21:34:37
8楼2014-05-14 15:28:15
