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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶活测定时，为什么不加酶液的对照吸光度变化很快，而加了酶液的样品反而非常稳定？
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profax

铁虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定时，为什么不加酶液的对照吸光度变化很快，而加了酶液的样品反而非常稳定？

要崩溃了，药品配制，操作方法应该都没有什么问题啊。。。

[ Last edited by profax on 2012-7-24 at 01:49 ]
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1楼 2012-07-24 01:48:02
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一点，酶活的测定是加了酶液的样品吸光度与对照组吸光度的比较啊，而不是看谁变化快啊。
第二点，你的对照组溶液可能不稳定，你可以做一下该溶液的稳定性试验。
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海纳百川，有容乃大
2楼2012-07-24 14:14:03
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profax

铁虫 (小有名气)
我是从参考文献上面找到的测定方法，如果对照组溶液不稳定，是不是说明这个方法不可靠？谢谢。
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3楼2012-07-24 20:52:35
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profax

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xyz7819227 at 2012-07-24 14:14:03
第一点，酶活的测定是加了酶液的样品吸光度与对照组吸光度的比较啊，而不是看谁变化快啊。
第二点，你的对照组溶液可能不稳定，你可以做一下该溶液的稳定性试验。

我测定X酶的酶活基本原理是：A+B+C==D+E,这个反应是在酶X的催化下进行的，吸光度是测的生成物质D的吸光度，而对照溶液是没有加入X酶，用蒸馏水替代。
问题来了，对照吸光度在前三分钟内一直下降，而样品溶液的吸光度及其稳定。
求赐教。
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4楼2012-07-24 20:57:58
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那确实说明你的对照组溶液不稳定，但是换个角度想，这恰恰又证明了X酶具有一定的活性，生成的D能够维持溶液的稳定性。主要看你要的是什么以及你如何去分析了。
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海纳百川，有容乃大
5楼2012-07-24 21:06:44
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profax

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xyz7819227 at 2012-07-24 21:06:44
那确实说明你的对照组溶液不稳定，但是换个角度想，这恰恰又证明了X酶具有一定的活性，生成的D能够维持溶液的稳定性。主要看你要的是什么以及你如何去分析了。

额，不好意思，上面说错了，测定的是反应物A的吸光度的。。。而酶X的作用是催化A的氧化反应，照理讲A的吸光度应该是降低的，但是现在很稳定。
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6楼2012-07-24 21:17:59
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

额。。。酶活测不出来很正常的，这就要从根本上找原因了，你的酶是从哪来的？微生物培养发酵产的？
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海纳百川，有容乃大
7楼2012-07-24 21:20:21
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profax

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xyz7819227 at 2012-07-24 21:20:21
额。。。酶活测不出来很正常的，这就要从根本上找原因了，你的酶是从哪来的？微生物培养发酵产的？

啊，很正常的吗？酶是用植物果实提取的粗酶液。。。提取液的配方也是从文献上面找的
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8楼2012-07-24 21:22:31
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zcy1214

木虫 (著名写手)

普通青年
兄弟，我也要测酶活，请问你测的是什么的酶啊
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达则兼济天下，穷则独善其身
9楼2012-07-28 11:28:10
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profax

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zcy1214 at 2012-07-28 11:28:10
兄弟，我也要测酶活，请问你测的是什么的酶啊

我测的抗坏血酸氧化酶那些
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10楼2012-08-02 19:09:50
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