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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 测酶活前处理心得
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fanger

银虫 (小有名气)

[交流] 测酶活前处理心得 已有6人参与

一般一瓶动物细胞长满后用胰酶消化，消化完以后用D-Hinks吹打下来，4℃，1000转，6~10min 离心。倒掉上清，再用D-Hinks重新分散，4℃，1000转，6~10min 离心，倒掉上清（如果暂时不要测酶活的话，直接将离心后的沉淀冻于-80℃，可保存2~3个月，用时直接加生理盐水进行后处理即可）。再用生理盐水重新分散，枪头打匀，超声波破碎，一般一瓶动物细胞加1mL生理盐水，一般用总工作时间300S,，开5S，停10S，槽温度稍设高点，一般50℃（此温度与你EP管内的温度无关，但是温度探针伸到反应体系中的温度就得设低些），20%功率。破碎完后4℃，12000转，5min 离心（看底部的沉淀多少，破碎完全的沉淀应该是很少的，如果还很多，重新打散后加时间再破碎）。将上清取出摇匀后检测蛋白浓度，我用的是考马斯亮蓝+BSA法。然后蛋白用于即时检测，暂时不用的话立刻冻在-80℃，可保存2~3天，但破碎后的蛋白最好当天检测，不然活性会受到影响。

[ Last edited by silicare on 2014-5-14 at 18:30 ]
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lixingliang lyyimi

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做好自己！
1楼 2012-01-06 14:40:45
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zxhong
3楼2012-01-13 10:34:48
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lixingliang

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
参考一下，很有价值啊
赞一下(1人) 回复此楼
我不管你看起看不起我，我都是个演员
2楼2012-01-08 08:04:11
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bjfwjp

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
实用的方法，非常感谢。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-01-16 13:52:39
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cuiwenchao

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能问一下你超声破碎的体积吗
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-13 21:34:37
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