| 查看: 6484 | 回复: 25 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
环形质粒酶切电泳图分析求解
|
||
|
图注：上一排左起分别为maker，对照原始质粒，所有酶均购自Fermentas公司，E1.1，E1.2，E1.3分别为同一个酶(BamHI)不同购买时间的样品；E2为AvrII；E3为Bst119I；E4.2为酶SpeI。 下排左起分别为maker；对照原始质粒；1.1，1.2，1.3为E1.1，E1.2，E1.3分别与E2双酶切(目的条带大小应为1500bp与5800bp)；2.1，2.2为E4.1，E4.2分别与E3双酶切(两个酶切位点间隔94bp)，E4.1为酶SpeI。 其他：maker为1Kb ladder，质粒大小约7300bp，最大条带为10000，最小片段为250bp。BamHI有星号活性，其余酶均可使用同一种buffer。由于电泳时间较长(90V，50min)，下排双酶切小片段(94bp)可能已经跑过，大片段(约7200bp)稍快于未经酶切片段。 问题如下：1、为何BamHI单酶切会出现如此多的条带，为了双酶切我采用的Tango Buffer，可能会导致非特异性增多？预实验时做的与E2的双酶切没有出现如此多的杂带。 2、E2，E3的单酶切是否算成功？跑的要比对照慢，看了几个帖子，有的说线性的要比环形的慢，有的说要快，我有些迷糊。 3、E4.1，E4.2的单酶切是否成功？貌似跑的也比对照要慢一些。  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有193人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 大家帮忙看下这张质粒电泳图
已经有7人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 质粒单酶切出现两条带
已经有18人回复
- 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切，看图！
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
已经有12人回复
zehego
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1541.5
- 散金: 14
- 红花: 1
- 帖子: 241
- 在线: 69.4小时
- 虫号: 999901
- 注册: 2010-04-18
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2012-01-04 12:20:39
faile18(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-10 06:18:09
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2012-01-04 12:20:39
faile18(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-10 06:18:09
|
你是15微升体系，每种酶各加1微升，还是两种酶加起来1微升？加酶的时候有一点必须注意的是，酶的总量不能超过酶切体系的10%,因为酶里面有50%的甘油，甘油终体积超过5%时会阻碍酶切的。另外你可以试试分别单酶切，做一个时间梯度看看能不能切开，如果单酶切都没切开，你最好是换新的酶。记得酶的体积不能超过10%。质粒刚提出来酶切前跑的胶是无法跟Marker比的，提出来的质粒一般有3种构型，凝胶电泳时是很难看得出来它的大小。 |
8楼2012-01-04 09:20:15
10楼2012-01-04 23:23:32
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2011-12-31 00:46:07
zehego
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1541.5
- 散金: 14
- 红花: 1
- 帖子: 241
- 在线: 69.4小时
- 虫号: 999901
- 注册: 2010-04-18
- 专业: 蛋白质组学
3楼2011-12-31 09:48:58
4楼2012-01-01 06:01:27
5楼2012-01-01 06:31:23
guojianping
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 14 (小学生)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 2436.4
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 494
- 在线: 49小时
- 虫号: 919955
- 注册: 2009-12-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2012-01-01 15:31:30
7楼2012-01-04 00:27:26
9楼2012-01-04 23:22:29
20