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zehego

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2012-01-04 12:20:39
faile18(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-10 06:18:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by faile18 at 2012-01-01 06:31:23:
酶切时间大概是6.5h,主要是我要采用双酶切,30min估计切不开吧?酶量较之前已经提高了,15微升体系,酶1微升,质粒0,5微升。最大的marker是10Kb的,这也是我一直纠结的事情,载体不是我构建的,我是从质粒提取开 ...

你是15微升体系,每种酶各加1微升,还是两种酶加起来1微升?加酶的时候有一点必须注意的是,酶的总量不能超过酶切体系的10%,因为酶里面有50%的甘油,甘油终体积超过5%时会阻碍酶切的。另外你可以试试分别单酶切,做一个时间梯度看看能不能切开,如果单酶切都没切开,你最好是换新的酶。记得酶的体积不能超过10%。质粒刚提出来酶切前跑的胶是无法跟Marker比的,提出来的质粒一般有3种构型,凝胶电泳时是很难看得出来它的大小。
8楼2012-01-04 09:20:15
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