| 查看: 5652 | 回复: 25 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
环形质粒酶切电泳图分析求解
|
||
|
图注：上一排左起分别为maker，对照原始质粒，所有酶均购自Fermentas公司，E1.1，E1.2，E1.3分别为同一个酶(BamHI)不同购买时间的样品；E2为AvrII；E3为Bst119I；E4.2为酶SpeI。 下排左起分别为maker；对照原始质粒；1.1，1.2，1.3为E1.1，E1.2，E1.3分别与E2双酶切(目的条带大小应为1500bp与5800bp)；2.1，2.2为E4.1，E4.2分别与E3双酶切(两个酶切位点间隔94bp)，E4.1为酶SpeI。 其他：maker为1Kb ladder，质粒大小约7300bp，最大条带为10000，最小片段为250bp。BamHI有星号活性，其余酶均可使用同一种buffer。由于电泳时间较长(90V，50min)，下排双酶切小片段(94bp)可能已经跑过，大片段(约7200bp)稍快于未经酶切片段。 问题如下：1、为何BamHI单酶切会出现如此多的条带，为了双酶切我采用的Tango Buffer，可能会导致非特异性增多？预实验时做的与E2的双酶切没有出现如此多的杂带。 2、E2，E3的单酶切是否算成功？跑的要比对照慢，看了几个帖子，有的说线性的要比环形的慢，有的说要快，我有些迷糊。 3、E4.1，E4.2的单酶切是否成功？貌似跑的也比对照要慢一些。  |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有205人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复- 大家帮忙看下这张质粒电泳图
已经有7人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 质粒单酶切出现两条带
已经有18人回复
- 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切，看图！
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
已经有12人回复
zehego
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1541.5
- 散金: 14
- 红花: 1
- 帖子: 241
- 在线: 69.4小时
- 虫号: 999901
- 注册: 2010-04-18
- 专业: 蛋白质组学
3楼2011-12-31 09:48:58
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2011-12-31 00:46:07
4楼2012-01-01 06:01:27
5楼2012-01-01 06:31:23