| 查看: 2935 | 回复: 22 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？ 已有1人参与
|
||
| 我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数，需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做，建议用探针法做。现在毫无头绪，不知道怎么设计，怎么合成？望各位高人指点一下…… |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有244人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 嵌入式Linux应用程序开发详解(完整版).
已经有174人回复
- 留学生活版好冷清啊，大家都没有生活了吗？
已经有31人回复
- PP复合材料的熔点问题？？
已经有8人回复
- 有人遇到过MS文件读写错误的情况吗？
已经有4人回复
- 英语复杂句翻译求助
已经有4人回复
- 推荐一部男人爱看的小说【转载】
已经有969人回复
- Taqman实时荧光定量PCR本地信号过强是什么原因？
已经有7人回复
- 多金币悬赏咨询四探针法测量粉体电导率的有关问题
已经有8人回复
- 四探针法测聚苯胺粉末电阻
已经有6人回复
- 【求助/交流】Taqman 探针设计
已经有3人回复
- 【求助】四探针法测试材料的电导率
已经有35人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR敏感度差是什么原因？探针法
已经有6人回复
- 【分享】realtime pcr 个人经验分享
已经有41人回复
2楼2011-12-22 16:45:28
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2011-12-22 18:04:14
4楼2011-12-22 19:37:05
5楼2011-12-22 19:38:04
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2011-12-22 23:55:56
austin2008
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 5184.4
- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 1812
- 在线: 259.5小时
- 虫号: 368365
- 注册: 2007-05-11
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2011-12-23 09:01:32
austin2008
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 5184.4
- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 1812
- 在线: 259.5小时
- 虫号: 368365
- 注册: 2007-05-11
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2011-12-23 09:03:35
austin2008
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 22 (小学生)
- 金币: 5184.4
- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 1812
- 在线: 259.5小时
- 虫号: 368365
- 注册: 2007-05-11
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 感谢参与交流 2011-12-24 17:09:48
wanhscn(金币+2): 感谢参与交流 2011-12-24 17:11:02
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 感谢参与交流 2011-12-24 17:09:48
wanhscn(金币+2): 感谢参与交流 2011-12-24 17:11:02
| 我做过检测重组毕赤酵母中外源基因拷贝数的实验，用的就是探针法，内参用的是GAPDH，检测的准确度和重复性还是很好的！引物和探针你自己不要设计，交给专业的设计公司设计和合成，也不是很贵，国内的公司一套探针引物（包括上下游引物，探针）也就1200+吧，国外的ABI等公司合成一般要贵一倍左右，一般可以做1500-2000个样品。SYBY法不是很准确，精确定量最好还是用探针法，我的实验用的样品的基因组DNA和你的不大一样，不过原理差不多的。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
flytime11159楼2011-12-23 09:16:52
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
★ ★
wanhscn(金币+2): good 2011-12-24 17:10:10
wanhscn(金币+2): good 2011-12-24 17:10:10
|
还好吧，转基因能插入多少多少拷贝呢，至少在植物转化中，几乎所有文献都是用southern杂交检测，有尝试过用荧光定量，但是效果显然不如此法准确，至少存在争议 下面是探讨用荧光定量验证植物转基因拷贝数的文献 Two-fold differences are the detection limit for determining transgene copy numbers in plants by real-time PCR Estimating the number of integrations in transformed plants by quantitative real-time PCR |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
10楼2011-12-23 10:00:20
50