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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数，需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做，建议用探针法做。现在毫无头绪，不知道怎么设计，怎么合成？望各位高人指点一下……
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1楼2011-12-22 16:26:31
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): good 2011-12-24 17:10:10
引用回帖:
8楼: Originally posted by austin2008 at 2011-12-23 09:03:35:
SOUTHERN杂交的方法早就过时了吧，是很传统的方法，拷贝数较少检测尚且可以，拷贝数越多检测越不准确，重复性也不好，而且样品较多的时候费用比较高

还好吧，转基因能插入多少多少拷贝呢，至少在植物转化中，几乎所有文献都是用southern杂交检测，有尝试过用荧光定量，但是效果显然不如此法准确，至少存在争议

下面是探讨用荧光定量验证植物转基因拷贝数的文献

Two-fold differences are the detection limit for determining transgene copy numbers in plants by real-time PCR

Estimating the number of integrations in transformed plants by quantitative real-time PCR
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flytime1115
10楼2011-12-23 10:00:20
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计引物探针，构建质粒，定量
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2楼2011-12-22 16:45:28
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-22 18:29:07
楼主做的是专基因检测吗？如果是，那不建议用荧光定量，主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成，sybr法也能做，两种方法没有质变
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3楼2011-12-22 18:04:14
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by shaquila at 2011-12-22 18:04:14:
楼主做的是专基因检测吗？如果是，那不建议用荧光定量，主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成，sybr法也能做，两种方法没有质变

是做转基因检测，southern杂交在做，可是无法确定拷贝数，仅仅根据灰度值判断，觉得不太靠谱
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4楼2011-12-22 19:37:05
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