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有木有人做过Taqman 探针法Real-Time？？ 已有1人参与
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| 我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数，需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做，建议用探针法做。现在毫无头绪，不知道怎么设计，怎么合成？望各位高人指点一下…… |
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shaquila
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3楼2011-12-22 18:04:14
shaquila
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6楼2011-12-22 23:55:56
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wanhscn(金币+2): good 2011-12-24 17:10:10
wanhscn(金币+2): good 2011-12-24 17:10:10
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还好吧，转基因能插入多少多少拷贝呢，至少在植物转化中，几乎所有文献都是用southern杂交检测，有尝试过用荧光定量，但是效果显然不如此法准确，至少存在争议 下面是探讨用荧光定量验证植物转基因拷贝数的文献 Two-fold differences are the detection limit for determining transgene copy numbers in plants by real-time PCR Estimating the number of integrations in transformed plants by quantitative real-time PCR |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
flytime111510楼2011-12-23 10:00:20
shaquila
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14楼2011-12-23 14:20:56
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wanhscn(金币+2): 感谢分享经验 2011-12-24 17:10:51
wanhscn(金币+2): 感谢分享经验 2011-12-24 17:10:51
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我在做realtiem pcr时候也有这个问题，即使误差控制的很小，但是也有可能出现20-30％的误差，特别是用2deltact法，多次实验结果可能不一样，对于低拷贝的材料，荧光定量是有检测下限的，不信你可以试试，如果用southern验证了单拷贝或双拷贝材料 你用realtime 作，会发现很多点在1-2这个区间上，无法分辨到底一个还是两个拷贝，因为做植物转基因考虑到后代分离的问题，所以要选单拷贝，而如你所说，微生物验证拷贝数有可能很多，比如4个拷贝和5个拷贝，即使不精细区分也许没有影响 如果你怀疑我说的，你可以去plant cell上面，看看做拟南芥和水稻的文章，找有验证拷贝数的，你会发现几乎没有用realtime的，基本都是单切southern验证～～ |
17楼2011-12-24 16:39:34