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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time?? 已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数,需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做,建议用探针法做。现在毫无头绪,不知道怎么设计,怎么合成?望各位高人指点一下……
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shaquila

金虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 一般观点是southern比real-time结果更可信 2011-12-24 15:27:21
引用回帖:
12楼: Originally posted by flytime1115 at 2011-12-23 12:47:09:
谢谢,southern杂交可重复性确实不是很高。现在也在做southern。因为我杂交片段比较小,一直来讲都比较困难

楼主我觉得是你方法问题,southern杂交重复性很高的,而且经常是用多个酶单切验证将诶过,只是比较难做而已,特别对于非同位素标记的,上样量要很大
14楼2011-12-23 14:20:56
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物探针,构建质粒,定量
2楼2011-12-22 16:45:28
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shaquila

金虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-22 18:29:07
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变
3楼2011-12-22 18:04:14
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by shaquila at 2011-12-22 18:04:14:
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变

是做转基因检测,southern杂交在做,可是无法确定拷贝数,仅仅根据灰度值判断,觉得不太靠谱
4楼2011-12-22 19:37:05
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