24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4180  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

angelee

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!大片段4kb左右基因PCR克隆方法 已有2人参与

求助!大片段4kb左右基因PCR克隆方法。之前,设计引物以cDNA为模板扩增,结果没有任何条带,究竟是为什么呢?求解答~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenglong_li

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题一样啊,3kb多的片段,扩了一个月,也没有好的电泳结果。
我分析或许与所扩增的基因有关系,其高级结果比较复杂,变性时间短的话解链不充分,变性时间长的话造成模板损伤,退火温度高的话引物与模板结合不充分,退火温度低的话造成非特异性条带,延伸过程rTaq酶每分钟1kb。
一些见解,供交流!
为天地立心,为生民立命,为往圣继绝学,为万世开太平。
7楼2012-04-02 10:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

大片段的反转是个问题哦
2楼2011-12-10 07:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyonggang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-10 10:56:18
先看看引物设计问题,Tm是不是太低了,有没有引物二聚体。

如果引物设计没有问题的话,看看cDNA序列中有没有高GC含量的片段等difficult 序列。有得话,试试two-step PCR,或者加点DMSO或甜菜碱。去网上google一下吧,会有有用的信息的。

4Kb不算太大,应该是没问题的。
3楼2011-12-10 10:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 9000哦,很厉害哦 2011-12-10 10:56:37
用takara的la taq酶,我9000都出来了,不过概率很小
4楼2011-12-10 10:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +15 稻妻小编 2026-03-26 15/750 2026-03-29 15:39 by Serene1974
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[基金申请] 面上5B能上会吗? +3 redcom 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:03 by god_tian
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +10 nnnnnnn5 2026-03-25 10/500 2026-03-29 11:42 by longlotian
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
信息提示
请填处理意见