24小时热门版块排行榜    

查看: 3900  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[求助] PCR目的条带没跑出,但是跑出了特异性很强的单一条带,是什么原因呢?

PCR目的条带没跑出,但是跑出了特异性很强的单一条带,是什么原因呢?

其实不是很确定目的基因是否存在,如果存在,目的条带的期望长度是1300bp左右,但是跑出的单一条带却在900bp左右,而且用的是TAKARA HS Taq酶(高特异性Taq酶)……这会是什么原因造成的呢?

高特异性聚合酶是否只是防止突变,并不会减少假阳性呢?

但是跑出了单一带,怎么偏偏不是目的条带呢,太诡异了~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

howbigpig

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR产物直接测序  (生工20块,华大25块)然后得到的序列去blast 就可以弄清楚到底是不是目的条带了
6楼2011-11-23 16:53:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

xiaoyang123(金币+1): 或许是扩增不完全,可是延伸时间为2min,应该已经比较长了吧,是否有其它原因导致了扩增不完全~~ 2011-11-24 14:35:33
引用回帖:
1楼: Originally posted by xiaoyang123 at 2011-11-20 22:04:03:
PCR目的条带没跑出,但是跑出了特异性很强的单一条带,是什么原因呢?

其实不是很确定目的基因是否存在,如果存在,目的条带的期望长度是1300bp左右,但是跑出的单一条带却在900bp左右,而且用的是TAKARA HS T ...

有可能扩增不完全。。。。
无完人!
2楼2011-11-20 23:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allmessup

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xiaoyang123(金币+1): 又一种可能 2011-11-24 14:35:57
引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2011-11-20 23:51:40:
有可能扩增不完全。。。。

re~如果存在相似度高的序列片段有可能被误以为是复制终点~
Ipsascientiapotestasest.
3楼2011-11-21 07:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

moqiyilei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiaoyang123(金币+1): 引物在Genebank上比对匹配度都不高,是直接来自文献的,所以实验一开始就有点空中楼阁的感觉 2011-11-24 14:36:54
引物blast一下,看是否具有特异性。
4楼2011-11-21 09:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见