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bluysky0902

金虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增不出条带

模板:2个莲雾品种,
   品种a的检测结果:含量908.1ng/µL,    A260:18.161,A280:10.219,A260/A280=1.78,A260/A230=1.04
     品种b的检测结果:含量610.2ng/µL, A260:12.203,A280:6.807,A260/A280=1.79,A260/A230=1.18

PCR体系:模板的量60ng,其他反应成分为标准加样(成熟体系,其他树种做没有问题)

引物:ISSR随机引物(随机用了10条)

结果:白板

原因:为什么啊?????
   个人认为是模板的问题,因为以前的时候,在其他个别品种(其他树种)也有发生过类似的情况,总是扩不出来,后来又把模板重新纯化(Tris酚)了一遍才扩出来,但模板损失量会很大,这次就是想问问虫友们,到底是什么原因造成的?除纯化之外,还有其他解决的方式吗?唉,头大。。。
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-10-19 18:32:38
退火温度很重要,可以设置温度梯度PCR,如果是随机引物最好不要用高保真酶,然后注意实验中其他如水、枪头等小细节,你的人品会来的。
一直向前!
9楼2011-10-19 16:24:39
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

bluysky0902(金币+5): 2011-10-13 22:40:08
wanhscn(MolEPI+1): 根据楼主反映,理应授予专家指数! 2011-10-14 18:05:25
植物的没做过,微生物的倒常做,随便提出的DNA扩增十有八九都会成功,DNA质量仅是一个方面。LZ其它条件没说 ,但感觉模板量太多了,50ul体系有个10ng足亦
2楼2011-10-13 21:28:03
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bluysky0902

金虫 (正式写手)

我也是觉得应该随便扩都能扩出来的,最近试验真不顺利~我再稀释下模板扩下试试,死马当活马医了~
3楼2011-10-13 22:39:41
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王玉民

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

bluysky0902(金币+2): 2011-10-15 09:34:18
反应条件呢?优化反应条件试试啊!
心晴
4楼2011-10-14 08:14:17
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