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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增不出条带
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bluysky0902

金虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增不出条带

模板：2个莲雾品种,
   品种a的检测结果:含量908.1ng/µL,    A260:18.161,A280:10.219,A260/A280=1.78,A260/A230=1.04
     品种b的检测结果:含量610.2ng/µL, A260:12.203,A280:6.807,A260/A280=1.79,A260/A230=1.18

PCR体系：模板的量60ng，其他反应成分为标准加样（成熟体系，其他树种做没有问题）

引物：ISSR随机引物（随机用了10条）

结果：白板

原因：为什么啊？？？？？
   个人认为是模板的问题，因为以前的时候，在其他个别品种（其他树种）也有发生过类似的情况，总是扩不出来，后来又把模板重新纯化（Tris酚）了一遍才扩出来，但模板损失量会很大，这次就是想问问虫友们，到底是什么原因造成的？除纯化之外，还有其他解决的方式吗？唉，头大。。。
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1楼 2011-10-13 16:16:38
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

bluysky0902(金币+5): 2011-10-13 22:40:08
wanhscn(MolEPI+1): 根据楼主反映，理应授予专家指数！ 2011-10-14 18:05:25
植物的没做过，微生物的倒常做，随便提出的DNA扩增十有八九都会成功，DNA质量仅是一个方面。LZ其它条件没说 ，但感觉模板量太多了，50ul体系有个10ng足亦
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2楼2011-10-13 21:28:03
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
我也是觉得应该随便扩都能扩出来的，最近试验真不顺利~我再稀释下模板扩下试试，死马当活马医了~
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3楼2011-10-13 22:39:41
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王玉民

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

bluysky0902(金币+2): 2011-10-15 09:34:18
反应条件呢？优化反应条件试试啊！
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心晴
4楼2011-10-14 08:14:17
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励反馈！慢慢做，一定会有结果的哈！ 2011-10-15 20:06:30
跟反应条件应该关系不大，昨天把DNA重新稀释为低浓度，做了个梯度，仍然是白板，看来要不重提DNA，要不就纯化DNA了，谢谢各位~
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5楼2011-10-15 09:34:09
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
新提取的DNA，随便稀释了个浓度，带都出来了，只是上面那种现象现在也搞不清楚~~
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6楼2011-10-19 08:51:27
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

白板是什么意思 有引物条带么  引物有问题么  不行降低退火温度试试
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冷风过心变热
7楼2011-10-19 13:52:10
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
呵呵，白板就是做个PCR体系没加模板，电泳后的样子，虽然我是加了，但结果却是白板
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8楼2011-10-19 15:22:27
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-10-19 18:32:38
退火温度很重要，可以设置温度梯度PCR，如果是随机引物最好不要用高保真酶，然后注意实验中其他如水、枪头等小细节，你的人品会来的。
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一直向前！
9楼2011-10-19 16:24:39
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xmcbanxia

铁杆木虫 (著名写手)
换聚合酶kod试试
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10楼2016-05-18 17:32:47
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