24小时热门版块排行榜    

查看: 5933  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蜗牛061610

木虫 (小有名气)

1

[求助] 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段,是不是不好连接?

有人说如果质粒上两个切点紧挨着的话,双酶切容易切错。我就先用一个酶进行酶切,切完后过pcr纯化试剂盒后用第二个酶进行酶切,再过pcr纯化试剂盒进行酶连。酶连了两批,挑去转化子抽取质粒进行pcr鉴定都是假阳性,搞不清楚是什么原因。

[ 来自科研家族 化学生物学 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

1
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

erlangshen89

木虫 (小有名气)

不同顺序酶切的话还用先回收再用另一个酶切还是直接再加入另一个酶?
10楼2013-08-09 10:56:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助发帖! 2011-10-09 20:19:42
蜗牛061610(金币+2): 谢谢交流 2011-10-10 08:29:41
两个酶切位点挨的近那是有多近啊?质粒要计算保护碱基的话要计算保护碱基对不是保护碱基个数,如果保护碱基不够酶切就没办法切好,我有疑问的是你为啥每次酶切完了都要回收一下,质粒损失多大啊。另外,连接如果连接不上看是否是酶切的末端有平也有粘,这样不太好连的,最好两边都是4碱基突出的粘端是最好连的。至于假阳性,出现这个结果的可能性还真不是一句两句说得清的,一个问题一个问题排除吧。
2楼2011-10-09 14:30:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2011-10-09 20:19:50
这个很有可能是载体没有切好所致,你最好翻一下酶的说明书,两个挨在一起的位点酶切时是有顺序要求的,不对的话很容易不完全,产生的多是载体自连的克隆,如果有选择的话建议换个载体或者换换酶切位点的好
在等待中涅槃重生
3楼2011-10-09 16:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hf2016

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酷似您这是不好酶切的原因比达大
一切开始于结束之后
4楼2011-10-09 21:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见