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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
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rollandyoung

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下

一、试验内容：
1. 质粒pCAMBIA1301DNA提取
2. 对提取的质粒DNA根据质粒图谱上的酶切位点进行验证性的酶切，所用酶Xho1。
3. 根据一篇已发表的论文所用的引物序列设计引物，进行验证性的PCR扩增。
二、主要试验材料：含有质粒的大肠杆菌（已经液体LB培养基摇菌16小时）
三、方法：参照分子克隆实验指南第三版 方案一 SDS碱裂解法制备质粒DNA：小量制备
四、结果：1.质粒DNA见电泳照片
          2.酶切产物经电泳显示无酶切产物出现
          3. PCR扩增无扩增产物出现
问题：
综合上述结果，使我对我提取的质粒DNA的质量产生了疑问，总结了以下问题
1. 我知道正常的质粒DNA电泳应该能够呈现出很亮且较宽的带型，这种情况属于正常吗？大家是否以前也遇到过这样的问题，是怎样解决的？
2. 质粒DNA提取过程中有哪些需要注意的地方？
3. 提取质粒DNA用到的试剂有特殊的要求和需要注意的地方吗？
4. 除上述问题外还有哪些需要注意和改进的地方？

已经被这个问题困扰了整个假期了，严重地影响了下一步的试验进程，故求助的心情十分之迫切，希望大家不吝赐教，在此先行谢过！
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rollandyoung

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1楼 2011-08-29 10:45:40
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-09-02 06:56:45
你的maker是多大？
感觉这个质粒若为环状超螺旋不会这么大
赞一下(1人) 回复此楼
一直向前！
7楼2011-09-01 13:26:00
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查看全部 28 个回答

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rollandyoung(金币+10): 感谢你的帮助，祝实验顺利！ 2011-08-29 16:25:01
西瓜(金币+1): 热心专家！ 2011-08-29 17:53:10
关于质粒提取可以参考http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3069255
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-29 15:41:09
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peace12039088

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-01 18:50:50
每次提的都这样吗？我也遇到过跑胶带型很差的情况，但似乎酶切验证后，还是符合预期的。琼脂糖胶跑的效果不好也有可能是胶本身的问题。所以，建议酶切或PCR 验证一下。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-29 16:55:33
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rollandyoung

金虫 (小有名气)
pcr和酶切我全都做了，但是都没做出来，正因为如此我才怀疑是质粒的提取问题，感谢你的建议。
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4楼2011-08-29 18:56:48
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