| 查看: 4427 | 回复: 9 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
[交流]
TEV酶的纯化出问题了，求解？？、
|
|||||
| 最近要春一批TEV酶用来切HIS标签，PROTOCOL中说的是过NI柱和Q柱纯，过的时候发现蛋白很容易沉（尤其是盐低的时候）；最后Q柱的峰很难看 跑出电泳来发现杂带很多 而且我要的是44KD的蛋白 但在30KD左右却又一条更明显的带。。。。。会不会是只有我要的蛋白沉了？？？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有67人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白酶分离纯化
已经有6人回复
- 酶的纯化问题
已经有8人回复
- 纯化后酶切产物的保存
已经有10人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【交流】酶分离纯化中的脱色问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】求教蛋白酶的分离纯化中遇到的问题
已经有5人回复
- 【求助】药典中规定纯化水硝酸盐的检测方法出现问题了？？
已经有7人回复
- 【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题
已经有22人回复
- 【求助/交流】测序问题：PCR产物未纯化测序会怎样？
已经有9人回复
- 有关水生生物酶纯化的文章有哪些比较快的SCI期刊可以投
已经有6人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
西湖大学拓扑光学、非厄米光学、太赫兹方向博士后招聘
+2/236
-
西湖大学拓扑光学、非厄米光学、太赫兹方向博士后招聘
+2/234
-
西湖大学2026年秋季入学物理学、光学、电子信息方向博士生有名额速来！！！
+2/234
-
大连海事大学轮机学院博士名额1个
+1/176
-
坐标广州，征女友
+2/170
-
澳洲西澳大学Dr Yiran Liu招全额奖学金和CSC奖学金博士生（3.8万澳币/年）
+1/100
-
ChineseResearchLaTeX: 开源、免费的vibe coding辅助国自然写作
+1/86
-
海南大学海洋技术与装备学院-科研助理招聘（可读博）--膜分离水处理方向
+1/36
-
国家级青年人才课题组招收2026级硕士研究生
+1/33
-
澳大利亚麦考瑞大学(Macquarie University)国际博士硕士全额奖学金-计算机-26年中开学
+1/32
-
香港中文大学医学院 诚聘 研究助理教授 (医工结合/生物信息学方向)
+1/32
-
英国布里斯托大学诚招博士生，博士后和联合培养生
+1/32
-
有没有人做过这种结构的顺式体向反式体的转化？
+1/32
-
南京医科大学国家级高层次青年人才团队招收博士后
+1/15
-
大叔征婚
+1/14
-
宁波诺丁汉大学招收26年秋/27年春固废协同转化与低碳冶金方向全奖博士生
+1/7
-
澳科大招收2026年秋季药物递送/生物材料方向硕士研究生（3月5日18:00报名截止）
+1/6
-
中国地质大学（武汉）杨华明课题组刘磊研究员招收冶金固废资源高值化利用方向博士
+1/5
-
广东省环境科学研究院招聘高分辨质谱方向博士一名
+1/4
-
【科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/3
2楼2011-08-26 10:24:49
3楼2011-08-26 10:44:22
4楼2011-08-26 12:09:53
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19404.9
- 帖子: 6581
- 在线: 2773.3小时
- 虫号: 856414
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 大牛辛苦了！ 2011-08-27 00:59:34
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 大牛辛苦了！ 2011-08-27 00:59:34
|
TEV酶现在可以在实验室自己表达纯化和使用，不一定要买试剂试剂公司的，所以你要自己做这个酶，就先查一下这个质粒是怎么来的，前面有没有人纯化过这个质粒表达的TEV酶，八成是有的，要不然你也拿不到这个质粒，问问他们纯化的操作和结果，再与自己的比较，看看是哪个地方出问题。 大肠杆菌表达蛋白质如果出现包涵体就很麻烦，这时候要先看看上清液中有没有你想要的蛋白质，如果有，那就别做包涵体复性，费时费力还效率特低，宁可摇多一些菌取上清液也别做复性。对于折叠正确的酶来说，在高盐的时候容易变性（6M以上的尿素可以将肽链相互纠缠的包涵体溶解），而在低盐例如20mM Tris-HCl 时能保持良好的溶解状态，例如我的淀粉酶，所以假如你的TEV酶是包涵体用尿素溶解的，那么你就思考一下，看看上清液中存在多少，别碰包涵体了。 假如形成了包涵体，你试一下其它宿主，例如BL21,ROSSETA,Origami（这个是brightfuture01用过，我没用过）等等，很可能有一个宿主表达出来的就主要处于上清液了，我几年前表达过5个纤维素酶基因，都主要在上清液。如果还都是包涵体，那么可能就是表达量多的时候就容易形成包涵体，试一下非表达菌株，例如JM109、EPI100、DH5alpha，可能虽然表达量少，但上清液中有你要的蛋白质。 |
5楼2011-08-27 00:22:03
6楼2011-08-27 13:56:42
7楼2011-08-27 13:58:37
8楼2011-08-28 16:18:18
9楼2014-07-24 12:26:21
10楼2015-05-26 10:59:07